[发明专利]渤海湾杀线虫丝状海洋真菌枝顶孢霉的筛选及应用

权利要求书

1. 一种渤海湾杀线虫丝状海洋真菌枝顶孢霉菌株（Acremonium cephalosporium）BH-0531菌株，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为：CGMCC-5445。

2.一种权利1所述渤海湾杀线虫丝状海洋真菌枝顶孢霉菌株BH-0531的筛选方法，其特征在于：

（1）菌种的分离、纯化：

样本来自渤海湾的底层海水，经孔径0.45μm 硝酸纤维素滤膜 (f50) 过滤后，将滤膜置于海水固体培养基上,于26℃ 恒温培养获得菌落，采用挑单孢法，将其转入新的平板培养，此过程反复进行，直至菌落纯化为止；所述的海水固体培养基：葡萄糖10g/L，蛋白胨2g/L，酵母膏2g/L，海水600mL/L，蒸馏水400mL/L，琼脂20 g/L；

（2）菌种的筛选：

1）将上述分离纯化的菌种接种于液体培养基中进行摇瓶发酵培养，发酵培养后的培养液经孔径为0.22μm滤膜过滤，收集得到发酵滤液；其中所述的液体培养基是指查氏液体培养基：NaNO₃  2 g/L，K₂HPO₄ 1 g/L，KCl 0.5 g/L，MgSO₄ 0.5 g/L，FeSO₄  0.01 g/L，蔗糖 30 g/L，PH自然；

或海水液体培养基：葡萄糖10g/L，蛋白胨2g/L，酵母膏2g/L，海水600mL/L，蒸馏水400mL/L；

培养条件为：接种量2×10⁶的孢子悬液，转速120r/min，初始pH6.5，26℃发酵96h；

2）使用24孔细胞培养板，在每孔中加入1mL发酵滤液和100μL线虫悬液（平均1500头线虫/100μL），26℃静置3d，5d后，解剖镜下统计线虫死亡率；分离筛选后获得具有杀线虫功用的来自渤海湾杀线虫丝状海洋真菌枝顶孢霉菌株BH-0531，其毒力级别达到死亡率≥90% 的A级；

（3）菌种培养条件的优化：

优化的培养基为：去皮马铃薯150g/L，葡萄糖10g/L，酵母膏2g/L，海水含量600ml/L；其中去皮马铃薯150g/L指的是：去皮马铃薯150g置400mL蒸馏水中煮汁，取汁液，再定容至400mL；

优化的培养条件为：接种量2×10⁶的孢子悬液，转速120r/min，初始pH6.5，26℃发酵96h；培养得到杀线虫丝状海洋真菌枝顶孢霉菌株。

3. 权利1所述渤海湾杀线虫丝状海洋真菌枝顶孢霉菌株BH-0531菌株在制备作为生物活性物质用于农用杀虫剂、生物农药和抗生素发酵生产中的应用。

4. 权利2所述的应用，其中所述的农用杀虫剂、生物农药和抗生素对象为植物病原线虫、植物病原真菌和植物病原细菌。