[发明专利]一株新型广谱抗临床和植物致病真菌的芽孢杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种新型广谱抑制临床和植物致病真菌的细菌菌株Bacillus sp.AH-E-1及其应用。更具体地说，是涉及一种具有广谱抗真菌功能的新型生防细菌和益生菌。

背景技术

人类真菌感染一般分为两大类：浅部真菌感染和深部真菌感染。浅部真菌感染通常是由各种皮肤癣菌引起，主要侵犯皮肤、毛发、指甲等；而深部感染通常由白色念珠菌、新生隐球菌、粗球孢子菌等引起，主要侵犯内脏器官和深部组织，危害性很大，常可危及生命。近年来，随着广谱抗菌药物和免疫抑制药的大量使用，以及肿瘤化疗、器官移植和艾滋病的出现，产生免疫抑制的个体不断增多，使真菌感染的发病率呈上升趋势，耐药现象增多，真菌感染日益引起人们关注。据世界卫生组织(WHO)2004年统计估计，全球每年的系统性真菌感染人数为33.5万。其中最常见的是系统性念珠菌病，约占所有此类感染的70％左右，而其引起的死亡率又高达40％左右。同样，真菌病害也一直是危害植物生长、影响作物产量的主要病害，如何有效地防治真菌病害一直是育种学家们努力攻克的难题。

据统计，抗真菌药物在全球抗感染药市场中排列第三位，总销售额约为40亿-42亿美元，来自辉瑞公司的一份资料显示，近20年来，深部真菌感染呈持续增多趋势。面对临床的迫切需要，抗真菌药的进步似乎差强人意。目前，临床上应用的抗真菌药仍然以化学药物为主，如氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑、卡泊芬净、特比萘芬等，而我国真菌感染的广谱治疗依赖于两性霉素及其脂质体、5-氟胞嘧啶、氟康唑和伊曲康哇。但严重的毒性作用如肾脏损害限制了两性霉素的使用，5-氟胞嘧啶亦存在毒副作用及耐药问题，氟康唑和伊曲康唑尽管相对安全些，但在应用中亦出现耐药现象及天然耐药菌株，另外，氟康唑虽为WHO推荐的深度真菌感染首选用药，对白色念珠菌和新生隐球菌效果最好，但对克柔念珠菌和光滑念珠菌效果差，对曲菌无效。新研发的卡泊芬净、米卡芬净等作用于细胞壁的新型抗生素具有高选择性、安全性高、耐药少见等明显优势，是念珠菌感染和曲霉感染的首选治疗方案，但由于其价格昂贵，专利保护期很长，因此也限制了其在我国临床中的应用，另外，该药对隐球菌无效。因此，我国迫切需要研制一种具有自主知识产权的、高效、广谱、低毒安全的新型抗真菌药物。

芽胞杆菌是一类好氧、能产芽胞的革兰氏阳性杆状细菌，在自然界中分布非常广泛，生理特性丰富多样，是土壤和植物微生态的优势种群。由于它能产生脂肽抗生素、细胞壁降解酶类、细菌素和其它抗菌蛋白及挥发性抗菌物质，对某些植物病原真菌或细菌、甚至某些动物病原菌、病毒、支原体、肿瘤细胞均表现出一定的抑制作用，再加上这类细菌通过发酵可以大规模获得，产生的芽孢对高热、极酸、紫外线具有很强的耐受力，因此，近几年来成为国内外的研究热点，已报道的能抑制真菌生长的芽孢杆菌主要包括枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、苏云金芽孢杆菌(B.thuriniensis)、蜡状芽孢杆菌(B.cereus)、短小芽孢杆菌(B.pumilus)、多粘芽孢杆菌(B.polymyxa)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloloquefaci)等。然而，这些芽孢杆菌主要针对植物丝状致病真菌具有明显的效果，对于人类浅部真菌和深部真菌病原体，却未见抗真菌效果研究和报道。

发明内容

本发明的目的是提供一株可以广谱抑制临床和植物致病真菌的新型细菌菌株Bacillus sp.AH-E-1，其分类属于芽孢杆菌。

本发明的目的是提供制备Bacillus sp.AH-E-1抗真菌物质的方法，其特征在于：发酵培养基为土豆液体培养基，培养基组成为(g/L)：鲜土豆，500g；葡萄糖，20g；pH自然。

本发明公开了Bacillus sp.AH-E-1抑制的临床致病真菌种类，它至少包括以下20种丝状真菌和酵母菌：黄曲霉、烟曲霉、须癣毛癣菌、裴氏着色真菌、构巢曲霉、黑曲霉、卡氏分枝孢子菌、申克孢子丝菌、紧密着色真菌、红色毛癣菌、犬小孢子菌、总状毛霉、杂色曲霉、疣状着色真菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑假丝酵母、克柔念珠菌、近平念珠菌、新生隐珠菌。

本发明公开了Bacillus sp.AH-E-1抑制的植物致病真菌的种类，它至少包括以下13种丝状真菌：葡萄球座菌、花生茎点霉、马尔可夫叶点霉、稻瘟病菌、葡枝根霉、苹果黑腐皮壳菌、弯孢菌、棉花炭疽、禾谷镰孢、葡萄座腔菌、辣椒疫霉、茄链格孢、禾谷丝核菌。