[发明专利]注射用重组人甲状旁腺素及其代谢产物血药浓度的测定方法

说明书

技术领域

注射用重组人甲状旁腺素rhPTH(1-84)及其代谢产物rhPTH(1-34)血药浓度的测定方法，属于PTH血浆浓度的测定方法技术领域。

背景技术

PTH是甲状旁腺分泌的天然甲状旁腺素，其中具有生理活性的是含84个氨基酸残基的多肽激素，它可以刺激新骨形成和维持正常钙的平衡及磷代谢。注射用重组人甲状旁腺素(1-84)（Recombinant human parathyroid hormone (1-84) for injection，简写为rhPTH(1-84)）是一种含PTH全长序的重组人甲状旁腺素，由美国NPS-Allelix公司研发，2006年被FDA批准用于治疗妇女绝经后骨质疏松症。rhPTH(1-84)在体内可以部分降解为rhPTH(1-34)，rhPTH(1-34)结构与rhPTH (1-84)的N端34个氨基酸序列一致，rhPTH(1-34)可以增加骨密度、增强骨质和改善骨骼架构而成为骨质疏松症的主要治疗手段。rhPTH(1-34)由美国Eli Lilly公司研发，2002年FDA批准上市，在治疗绝经后骨质疏松症和部分老年男性骨质疏松症方面具有良好的疗效。rhPTH(1-84)具有更好的安全性，两者均为重要的抗骨质疏松症治疗药物，但由于每天必须服用使得价格过于昂贵限制了其临床应用。由于社会老龄化，骨质疏松症发病率逐年升高，rhPTH(1-84)因对骨量的增加效应比目前临床应用的其他治疗手段更有效而具有良好的临床应用前景，国内有多家生物制药公司在研发中。

rhPTH(1-84)在体内可以降解为不同长度的肽链，由于rhPTH(1-34)具有较高的药效性，因此测定rhPTH(1-84)的代谢产物rhPTH(1-34)在血浆中的浓度及药动力学研究，对了解注射用rhPTH(1-84)的药效学、作用机制及临床合理用药具有重要意义。

PTH血浆浓度的测定方法有放射免疫分析(Radioimmunoassay，RIA)、酶联免疫分析法(ELISA)、高效液相-质谱检测法(HPLC-MS)等。HPLC-MS法需特殊检测器，使用价格昂贵；ELISA及RIA分析法方法简便、操作便利，但由于血浆成分的复杂性，造成测定结果重复性和稳定性差等缺陷。

发明内容

本发明的目的提供一种注射用重组人甲状旁腺素rhPTH(1-84)及其代谢产物rhPTH(1-34)血药浓度的测定方法，采用固相萃取结合RIA检测同时测定rhPTH(1-84)在血浆中的浓度以及代谢产物rhPTH(1-34)血浆浓度的变化及药动学研究。提高了RIA检测的重复性和稳定性，增加了测定数据的可靠性。

本发明的技术方案：一种注射用重组人甲状旁腺素rhPTH(1-84)及其代谢产物rhPTH(1-34)血药浓度的测定方法：血浆样本采用固相萃取柱Styre Screen? H2P萃取，rhPTH(1-84)采用甲状腺素放免试剂盒ELSA-PTH测定：rhPTH(1-34)采用甲状腺素放免试剂盒RK-055-08(PTH 1-34)测定。

1、标准溶液制备

rhPTH(1-84)标准溶液的制备

取rhPTH(1-84)标准品，用去离子水溶解振荡，配制浓度分别为0、24、55、177、520pg·mL^-1标准品溶液；内质控(PC)配制成rhPTH(1-84)浓度为46 pg·mL^-1的溶液；外质控(QC)配制含rhPTH(1-84)标准品浓度为25、250、500 pg·mL^-1三种标准溶液，分装于离心管中，-80℃保存待用；

rhPTH(1-34)标准溶液的制备

取rhPTH(1-34)标准品用缓冲液稀释成10,20,40,80,160,320,640,1280 pg·mL^-1的标准溶液；

QC质控样品：精密称取rhPTH(1-34)标准，用缓冲液配制含rhPTH(1-34)浓度分别为40.00、160.00、640.00 pg·mL^-1；

所述缓冲液为甲状腺素放免试剂盒RK-055-08(PTH 1-34)所提供的缓冲液；下同。

2、血浆样品处理