[发明专利]一种提高杂交种种子纯度鉴定效率的方法

权利要求书

1.一种提高杂交种种子纯度鉴定效率的方法，其特征在于将3个大小均匀、饱满的种子或其他组织样本进行DNA提取，用于PCR扩增及焦磷酸测序检测SNP/InDel位点的等位基因频率分析；其中基因频率与测试样本中纯度换算数据模型的计算方法如下：

SNP位点等位基因频率换算：Y = -15.427X + 111.44，如图1所示；   

InDel位点等位基因频率换算：Y =-15.141X + 109.33，如图2所示；  

其中Y值为等位基因频率百分数，X值为测试样本中杂交种所占比重。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）样本前处理：如果为籽粒样本，取3粒大小均匀、饱满的种子，研磨至粉碎，充分混匀，取100-200mg进行DNA提取；如果为叶片组织样本，取3株相同部位叶片，叠加放置，使用适合大小的打孔器打取3个等大小的叶片部分，匀浆混匀，进行DNA提取；

（2）SNP/InDel位点等位基因频率测定换算：针对作物SNP/InDel位点进行PCR扩增，扩增所需引物如序列表NO1-NO8所示；焦磷酸测序检测，在AQ模式下获得该SNP/InDel位点不同基因型的等位基因频率；判断出3株测试样本中的杂交种数量，进而换算成种子纯度。