[发明专利]抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学免疫体外诊断领域，涉及一种免疫比浊检测试剂，进一步地，本发明涉及抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒。

背景技术

抗环瓜氨酸肽抗体(Anti-CCP)是环状聚丝蛋白的多肽片段，是以IgG型为主的抗体。临床研究表明，Anti-CCP对类风湿性关节炎（RA）具有良好的敏感性和特异性，并且与RA的活动性及病程进展相关，检测Anti-CCP对于RA的早期诊断和预后评估都很有意义。

目前，临床检测Anti-CCP有两种方法：1. 酶联免疫吸附测定法（Enzyme-linked Immuno Sorbent Assay，ELISA）；2. 电化学发光免疫测定法（Electrochemiluminescence immunoassay，ECLI）。这两种检测方法需要固相或电极支持，都需要特定的检测仪器，并且不能直接上全自动生化分析仪检测。

另外，酶联免疫吸附测定法对样品的单批次测定费用较高。因此，为节约经济成本，检测人员操作时，通常都需要收集到大量样品后才进行一次批量试验。

全自动生化分析仪操作方便快捷、准确度高，作为一种生物检测仪器，已经被广泛应用于生物医药行业。因此，需要研发出一种可以直接应用到全自动生化分析上的Anti-CCP测定试剂盒。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒，该试剂盒基于胶乳增强免疫透射比浊法（PETIA），可普遍用于各类全自动生化分析仪分析，使用时所需的测定时间短，特异性好，精密度高，准确度好。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：抗环瓜氨酸肽抗体测定试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，

所述R1试剂中的组分包括：

缓冲液0.4%~10%、

无机盐1% ~10%、

表面活性剂0.05%~2%、

防腐剂0.02%~0.2%、

干扰清除蛋白0.02%~0.2%、

(修饰的)CCP至敏的纳米PS微球0.01%~0.2%、

超纯水77.4%~98.5%；

所述R2试剂中的组分包括：

缓冲液0.4%~10%、

无机盐1%~10%、

表面活性剂0.05%~2%、

防腐剂0.02%~0.2%、

抗Anti-CCP的第二抗体0.001%~0.5%、

超纯水77.3%~98.529%；

并且，所述R1试剂和R2试剂的配合比例按重量百分数计为50～90:10～50。

上述技术方案中，CCP为环瓜氨酸肽的简称，本文其余部分所指相同。PS为聚苯乙烯的简称，即本发明选用聚苯乙烯制备胶乳颗粒，本文其余部分所指相同。所述无机盐是KCl、NaCl、KOH的混合物。

进一步的，所述(修饰的)CCP至敏的纳米PS微球的直径为60～500nm。

进一步的，所述抗Anti-CCP的第二抗体为非人源抗体或非人源抗体Fab双体片段。具体的，所述抗Anti-CCP的第二抗体可以是兔抗人抗体，鸡抗人抗体，鸭抗人抗体，鹅抗人抗体，羊抗人抗体，鼠抗人抗体，马抗人抗体，Fab双体中的一种。

进一步的，所述缓冲液为PB缓冲液或Goods’缓冲液。

进一步的，所述表面活性剂为TWEEN 20、EMULGEN120 和TX100中的一种。

进一步的，所述防腐剂为ProClin300、叠氮钠和硫柳汞中的一种。     

上述技术方案的技术原理是基于改进的胶乳增强免疫透射比浊法。如果R2试剂中没有抗Anti-CCP的第二抗体，那么在Anti-CCP的含量极少或是极高时，形成的沉淀物Anti-CCP-(修饰的)CCP至敏的纳米PS微球复合物（即抗体-抗原-PS颗粒复合物）很少，甚至无沉淀物形成，检测试剂将不能准确检测Anti-CCP的含量。因此，本发明技术方案在R2试剂中加入抗Anti-CCP的第二抗体，抗Anti-CCP的第二抗体结合在抗体-抗原-PS颗粒复合物中Anti-CCP的Fc端，发生抗原抗体特异性反应，形成了第二抗体-抗体-抗原-PS颗粒复合物，进一步增强了反应吸光度，放大了检测信号，可极大的提高检测Anti-CCP的灵敏度、扩大测定范围、缩短检测时间。