[发明专利]一种玫瑰红B的检测方法

说明书

技术领域：

本发明涉及色素检测技术领域，具体地讲是一种玫瑰红B的检测方法，主要用于调味品及肉制品中玫瑰红B的检测。

背景技术：

玫瑰红B又称罗丹明B (Rhodamine B)，或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成染料。主要用作实验室中细胞荧光染色剂、有色玻璃、特色烟花爆竹等行业，但因为它对调味品及肉制品等有提亮、增鲜等作用，大大改善感官色泽，因此有人将其作为添加剂使用。实验证明罗丹明B易诱导皮下组织产生肉瘤、有明确的致癌作用，对人体有极大的危害，因此不能作食品染色之用。

目前，玫瑰红B的检测方法多为定性方法，无法定量及确证。

发明内容：本发明的目的是克服上述已有技术的不足，而提供一种食品中玫瑰红B的检测方法，主要解决现有的玫瑰红B检测方法无法精确定量及定性确证的问题。

为了达到上述目的，本发明是这样实现的：一种玫瑰红B的检测方法，其特殊之处在于它包括如下工艺步骤：

a取样品于容器中，加入正己烷和无水硫酸钠，涡旋混匀，超声提取，并离心分离，得上清液备用；再次加入正己烷，重复该步骤。

b离心分离的提取液合并、定容，然后经氧化铝固相萃取柱净化，正己烷淋洗，然后甲醇洗脱，旋蒸至干；

c用高效液相色谱串联二级质谱（四极杆）检测，流动相为水（含0.1%甲酸）和乙腈，外标法定量；

d玫瑰红B含量计算。

本发明的玫瑰红B的检测方法，c步骤所述的高效液相色谱串联二级质谱（三重四极杆）检测条件为：

色谱柱：SB-C18柱，2.1×50mm 1.8μm； 流动相：A水（含0.1%甲酸）；B乙腈； 梯度洗脱：50%B，1min→95%B，2.5min →50 %B，6.5min； 流速0.2mL/min； 进样量：10μL； 柱温：40℃；

采用ESI离子源，正离子模式，MRM扫描，碎裂能（160V，160V），碰撞能（52V，82V）干燥气温度：300℃。

本发明的一种玫瑰红B的检测方法，该方法的原理是首先采用正己烷提取，然后经氧化铝柱萃取，最后经高效液相色谱串联二级质谱（三重四极杆）定性定量检测，得到待测液的浓度，然后根据称量及定容参数，换算为样品中的玫瑰红B含量。

本发明的一种玫瑰红B的检测方法与已有技术相比具有突出的实质性特点和显著进步：采用高效液相色谱串联二级质谱（三重四极杆）检测，能够对食品中玫瑰红B进行准确定性与定量，该方法前处理简单，结果准确，选择性高，检测限低，对食品中测试玫瑰红B含量及定性确证比较适用。

具体实施方式：

为了更好地理解与实施，下面结合实施详细说明本发明。

实施例1，称取2.5g（m）试样，于50mL具塞离心管内，加无水硫酸钠（与样品中含水量的重量比值约1:1），再加约10 mL正己烷，涡旋0.5min，超声20min，4500r/min离心，取上清液于25mL具塞比色管中，再加10 mL正己烷，重复上述操作，合并上清液，并用正己烷定容至25mL（V₁），取5mL（V₂）过已活化的氧化铝固相萃取柱，8mL正己烷淋洗，最后用7mL甲醇洗脱，旋蒸至干；用高效液相色谱串联二级质谱（三重四极杆）检测，流动相为水（含0.1%甲酸）和乙腈，用1mL初始流动相定容，过滤，上机检测，检测条件为：色谱柱：SB-C18柱，2.1×50mm 1.8μm； 流动相：A水（含0.1%甲酸）；B乙腈； 梯度洗脱：50%B，1min→ 95%B，2.5min →50 %B，6.5min； 流速0.2mL/min； 进样量：10μL； 柱温：40℃；采用ESI离子源，正离子模式，MRM扫描，碎裂能（160V，160V），碰撞能（52V，82V）干燥气温度：300℃；得待测液浓度C；并计算得到样品中玫瑰红B的含量为：

X=                                                

X：试样中玫瑰红B的质量浓度；

m：试样称重量；

C：上机检测液的体积浓度；

V₁：正己烷初始定容体积；

V₂：经氧化铝固相萃取柱萃取的溶液体积。