[发明专利]一种用内生枯草芽孢杆菌生产生物农药的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物农药的制造方法，特别涉及一种用内生枯草芽孢杆菌生产生物农药的方法。 

背景技术

小麦纹枯病已成为我国麦区常发病害。小麦受纹枯菌侵染后，在各生育阶段出现烂芽、病苗枯死、花秆烂茎、枯株白穗等症状。烂芽芽鞘褐变，后芽枯死腐烂，不能出土；病苗枯死发生在3-4叶期，初仅第一叶鞘上现中间灰色，四周褐色的病斑，后因抽不出新叶而致病苗枯死；花秆烂茎拔节后在基部叶鞘上形成中间灰色，边缘浅褐色的云纹状病斑，病斑融合后，茎基部呈云纹花秆状；枯株白穗病斑侵入茎壁后，形成中间灰褐色，四周褐色的近圆形或椭圆形眼斑，造成茎壁失水坏死，最后病株因养分、水分供不应求而枯死，形成枯株白穗。 

引起小麦纹枯病的病原主要是禾谷丝核菌，小麦纹枯病菌除对小麦表现强劲的致病能力，还侵染玉米，水稻。目前主要的防止方法为：播种前药剂拌种用种子重量0.2％的33％纹霉净(三唑酮加多菌灵)可湿性粉剂或用种子重量0.03％-0.04％的15％三唑醇(羟锈宁)粉剂、或0.03％的15％三唑酮(粉锈宁)可湿性粉剂或0.0125％的12.5％烯唑醇(速保利)可湿性粉剂拌种。播种时土壤相对含水量较低则易发生药害，如每kg种子加1.5kg种子加1.5mg赤霉素。②翌年春季冬、春小麦拔节期，667m2用5％井冈霉素水剂7.5g对水100kg或15％三唑醇粉剂8g，对水60kg或 20％三唑酮乳油8-10g，对水60kg，12.5％烯唑醇可湿性粉剂12.5g，对水100kg或50％利克菌200g，对水100kg喷雾，防效比单独拌种的提高10％-30％，增产2％-10％。此外还可选用33％纹霉净可湿性粉剂或50％甲基立枯灵(利克菌)可湿粉400倍液。 

以上防治小麦纹枯病的方法会存在一些不足，上述化学农药的长期、大量施用容易产生环境污染、抗药性以及农药残留等问题，因此以植物微生态学为基础控制有害生物的生物防治技术已成为小麦纹枯病防治研究的热点。 

发明内容

针对现有小麦纹枯病防治中长期、大量施用化学农药容易产生环境污染、抗药性以及农药残留等问题，本发明提供了一种用内生芽孢杆菌生产生物农药的方法。该方法利用了能防治小麦纹枯病的内生芽孢杆菌的代谢活性物与适乐时悬浮种衣剂即2.5％咯菌腈制剂复配，防治效果明显。 

为达到上述目的，本发明提供的技术方案为： 

一种内生芽孢杆菌EBS，于2011年9月5日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，馆藏号为CGMCC  No.5239。保藏单位的地址为“北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所”，保藏地址的邮政编码为“100101”，其分类命名为“枯草芽孢杆菌”，分类命名的拉丁文名称为Bacillus、subtilis。 

一种用内生芽孢杆菌生产生物农药的方法，包括如下步骤： 

(1)将内生芽孢杆菌菌株于含有牛肉膏0.3％，蛋白胨1.0％，NaCl 0.5％的种子培养液中，32℃、170r/min条件下振荡培养24h，备用； 

(2)将上述内生细菌种子培养液，按接种量为6％的比例接种至包括有黄豆饼粉、可溶性淀粉、蛋白胨和NaCl的发酵培养基中，发酵温度为30℃-34℃，pH值为5-9的条件下发酵培养72h； 

(3)当所述发酵培养液菌体浓度大于0.5×10⁹cfu/mL后，进行喷雾 干燥，制成菌体含量大于2.0×10⁹cfu/g的可湿性粉剂。 

作为本技术方案进一步改进，将所述发酵后的发酵培养液与10％适乐时悬浮种衣剂即2.5％咯菌腈制剂复配，其复配比例为7∶3。 

有益效果：内生枯草芽孢杆菌(简称EBS)能在小麦根际和体内定殖以及该内生细菌可产生表面活性素(Surfactin)类抗菌物质；活菌剂对小麦纹枯病的室内防治效果为91.2％，大田防治效果为66.3％，代谢活性物与适乐时悬浮种衣剂或咯菌腈制剂复配后EC₅₀为81.845μg/mL，增效比值为SR＝1.23，二者对小麦纹枯病的防治具相加作用，而且防治效果稳定。大田防治效果与咯菌腈单剂相当，大大降低了化学农药的施用量和防治成本。 

说明书附图 

图1为EBS的菌落生长形态图； 

图2为EBS的芽孢形态显微观察图； 

图3为EBS生长曲线图；