[发明专利]两片段连接法进行HBV全基因组克隆的方法

权利要求书

1.一种采用两片段连接法进行HBV全基因组克隆的方法，先将HBV的DNA进行巢式PCR反应，然后分别对扩增出的HBV CS区和pSX区两个片段进行酶切，并将两个酶切片段连接，以此连接产物为模板用PCR方法扩增该全基因组后进行克隆；其特征为：

所述CS区为HBV基因组的nt 1821～nt 272，pSX区为nt 3194～nt 1825；

且进行巢式PCR反应时所用特异性引物的序列如下：

SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3是CS区的外引物序列；

SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4是pSX区的外引物序列；

SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：7是CS区的内引物序列；

SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：8是pSX的内引物序列。

2.权利要求1所述的方法，在引物SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：8序列中加入BspQ I酶切位点。

3.权利要求1或2所述的方法，所述连接，是使用T4 DNA连接酶进行。

4.权利要求1或2所述的方法，进行巢式PCR反应时，调整内外引物的浓度至：外引物终浓度为10nmol/L，内引物终浓度为200nmol/L。

5.权利要求1或2所述的方法，用PCR方法扩增出两个片段时，采用一管式巢式PCR方法。