[发明专利]对土壤中禾谷多粘菌进行检测的方法

权利要求书

1.一种对土壤中禾谷多粘菌进行检测的方法，其特征在于，在NCBI中筛选出多个禾谷多粘菌核糖体rDNA序列，在它们相对于其他菌的rDNA保守区域设计一对特异性引物SEQ ID No.1和SEQ ID No.2，通过上游引物SEQ ID No.1和下游引物SEQ ID No.2对土壤样本进行PCR扩增，由扩增产物判断土壤中禾谷多粘菌的存在状况。

2.根据权利要求1所述的对土壤中禾谷多粘菌进行检测的方法，其特征在于， PCR反应体系为：10 × PCR Buffer 2.5 μL，dNTP 2 mM  2.5 μL，上游引物10 μM  1.0 μL，下游引物 10 μM  1.0 μL， DNA  1.0 μL，Taq DNA polymerase  5 U/μL  0.2 μL，ddH₂O 16.8 μL，终体积为25μL；PCR扩增程序为：94℃预变性5 min； 94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，共进行35个循环；最后72℃延伸8 min。

3.根据权利要求1或2所述的对土壤中禾谷多粘菌进行检测的方法，其特征在于，所述的由扩增产物判断土壤中禾谷多粘菌的存在状况是指：对扩增产物进行1%的琼脂糖凝胶电泳，电泳结束后将琼脂糖凝胶进行EB染色，在紫外灯下观察，是否存在大小为300bp的DNA条带，由此判断土壤中是否含有禾谷多粘菌。

4.根据权利要求3所述的对土壤中禾谷多粘菌进行检测的方法，其特征在于，对大小为300bp的DNA条带的特异性片段进行凝胶回收后，进行克隆转化，其测序结果与禾谷多粘菌序列AJ841287的同源性为100%。

5.根据权利要求1所述的对土壤中禾谷多粘菌进行检测的方法，其特征在于，所述PCR反应体系为：2×Master Mix 10 μL，上游引物 10 μM  0.5 μL，下游引物 10 μM   0.5 μL， DNA 1.0 μL ，ddH₂O 8 μL，终体积为20μL；PCR扩增程序为：94℃预变性 5 min；94℃变性 10 s，55℃退火 10 s，72℃延伸20 s，共进行40个循环。

6.根据权利要求1或5所述的对土壤中禾谷多粘菌进行检测的方法，其特征在于，所述的由扩增产物判断土壤中禾谷多粘菌的存在状况是指：由荧光定量PCR仪根据荧光信号的变化及标准曲线直接测出土壤中禾谷多粘菌实际含量。

7.根据权利要求5所述的对土壤中禾谷多粘菌进行检测的方法，其特征在于，所述的荧光定量PCR仪为Stratagene公司或ABI公司或Eppendorf公司或BioRad公司或Corbett公司生产的荧光定量PCR仪。