[发明专利]一种多表位TK1抗体的制备及其在评估肿瘤患者治疗效果中的应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种抗体及其应用，具体讲涉及一种高特异性、高灵敏度多表位TK1抗体的制备及其在肿瘤患者治疗效果的评估中的应用。

背景技术：

癌症是人类的死亡杀手，尽管有许多影像检测方法和治疗手段，例如化学治疗，内分泌治疗，放射治疗和手术等，虽然已经有了很大的进步，但远远不可能达到完美的程度，伴有复发和转移的可能。

癌症是一种细胞异常增殖的慢性疾病。癌细胞异常和失控的增殖是由于正常细胞中与增殖相关的基因发生了某种或多种突变所引起，因而准确了解肿瘤细胞增殖变化规律是评价和分析肿瘤发展方向，判断治疗效果和制定患者个体化治疗方案的重要参数，但是准确检测和动态分析肿瘤患者体内肿瘤细胞的增殖动力却是当前肿瘤治疗阶段亟待解决的难题。肿瘤的治疗手段主要是通过手术切除/杀伤治疗/抑制治疗等方法控制肿瘤组织的浸润和转移，例如手术治疗、放射线治疗、化学药物治疗、内分泌治疗等方法都有清除/杀伤/干预肿瘤细胞的作用，但达不到完美的程度，需要与癌症中细胞的增殖度来联合评估治疗效果，如DNA流式细胞分析，因设备昂贵，技术操作要求高，不能动态分析等缺陷不能实现临床普及应用。临床上缺乏一种能直接检测肿瘤细胞增殖状况，并能与手术切除/杀伤治疗/抑制治疗等方法同步评估肿瘤细胞增殖的直接指标和方法。现阶段应用影像，超声和肿瘤标志物检测和评估的方法均存在分析滞后和间接判断的问题。

对于现有许多肿瘤标志物进行回顾研究，例如CEA，CA15-3，CA199和AFP等一系列标志物，由于这类标志物不能直接反应肿瘤细胞的增殖，虽然可以监视治疗效果，但它们通常是不可能用单独一种肿瘤标志物的水平来检测和诊断癌症，不能准确评价肿瘤治疗过程中肿瘤细胞增殖变化的状态。

二十世纪五十年代末，研究者发现胸苷激酶(TK，ATP：thymidine 5′-phosphotransferase，EC.2.7.1.21，简称TK)，一种嘧啶补救途径的酶，催化胸苷磷酸化为胸苷酸。人细胞中TK以两种同功酶的形式出现：细胞质胸苷激酶(简称TK1)和线粒体胸苷激酶(简称TK2)。胸苷激酶1(简称TK1，也称为细胞质胸苷激酶)是与细胞周期调控密切相关的细胞周期类标志物，随后的大量基础研究和实验肿瘤学证明了TK1表达是与细胞生长状态紧密联系的，因此TK1可以作为一种好的细胞增殖标志物来检测增殖细胞的增殖活性，因此将适用恶性肿瘤的增殖度检测。

对血清胸苷激酶1值(STK1)进行分析，重要的是，体内正常细胞增殖不会导致血清胸苷激酶1水平的增加，因为正常的细胞分裂是按照细胞凋亡调控规律进行的，细胞内胸苷激酶1在细胞分裂之前已经被降解，但肿瘤细胞是逃逸了细胞凋亡的调控规律，导致细胞异常分裂增殖，肿瘤细胞(包括S和G2期的细胞)中的胸苷激酶1被释放至体液。因此，在细胞过度增生的情况下，STK1水平与肿瘤细胞增殖速度相关，并与肿瘤疾病的轻重程度和治疗效果有关，可用于患者的治疗监视。由于在总的STK中，STK1高于95％，TK2低于5％，一种STK的活性检测同样用于血清学，作为一优选的肿瘤细胞增殖标志物，与STK1增强发光免疫点印迹法检测相比现用非同位素STK的活性检测程序，还是比较繁琐和耗时。

采用人TK1抗体检测STK1浓度水平更能真实代表体内是否存在异常增殖的细胞，因此，在近10多年里，按照抗体制备原理，一种TK1抗体已经试用于临床实践中。多个团队制备了不同的抗TK1抗体用于肿瘤疾病的鉴定和监控，但灵敏度需要提高，也并不适用于常规人群体检筛查。