[发明专利]人CRYBB1基因突变及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及人CRYBB1的基因突变和分析人CRYBB1基因的突变的方法，以及此突变在白内障中辅助诊断的用途。

背景技术

晶状体蛋白首先在1893年由发现[C.T.，Untersuchungen der.Proteinsubstanzen in den lichtbrechenden Medien des Auges.Z.Physiol.Chem.1893；18：61-106]。它是脊椎动物晶状体最主要的结构蛋白，占晶状体蛋白质总量的90％。晶状体蛋白有特殊的空间结构，这对于维持晶状体的透明性有非常重要的作用。晶状体蛋白根据分子量由大到小，可分为α-，β-，γ-晶状体蛋白。

β-晶状体蛋白(Beta crystallin，CRYB)可分为酸性蛋白(βA)及碱性蛋白(βB)两个亚组，每个亚组分别由3个基因编码(CRYBA1，2，3；CRYBB1，2，3)[Jochen Graw.Genetics of crystallins：Cataract and beyond.Exp.Eye Res.2009；88：173-189]。其中位于22q11的编码βB1-晶状体蛋白的基因CRYBB1和位于22q11.2的编码βB2-晶状体蛋白的基因CRYBB2突变与先天性白内障的发生关系极其密切[Wang J.，Ma X.，Gu F.，Liu N.，Hao X.，Wang K，Wang N and Zhu S.A missense mutation S228P in the CRYBB1 gene causes autosomal dominant congenital cataract.Chin.Med.J.2007；120(9)：：820-824.，Yang J.，Zhu Y，Gu F，He X，Cao Z，Li X，Tong Y，Ma X.A novel nonsense mutation in CRYBB1 associated with autosomal dominant congenital cataract Molecular Vision 2008；14：727-731]。

单核苷酸突变可能会对基因所编码的蛋白质产生重要影响，晶状体蛋白编码基因的分子研究有助于发现潜在的患病者。到目前为止，还没有人CRYBB1基因Q227X突变导致遗传性白内障病的报道。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种检测CRYBB1基因突变的方法。

本发明的第二个目的在于提供用于检测CRYBB1基因突变的试剂盒。

本发明在一常染色体显性遗传的三代核性白内障家系中发现位于CRYBB1基因上第六外显子的一个新突变Q227X。该C→T突变导致第四Greek Key基序上的227密码子由谷氨酸变成终止密码子，这一突变使CYBB1蛋白被截短了26个氨基酸，从而使其理化性质和功能发生改变。经研究发现，该突变与白内障形成显著相关。

为此，本发明第一方面，提供一种检测人CRYBB1基因的突变的方法，其包括以下步骤：

(a)确定在样品中人CRYBB1基因编码的氨基酸序列的第227位氨基酸，或该基因第18458至18460位碱基；

(b)检测该位置是否存在氨基酸Q→X的突变。

具体地，所述的突变是在SEQ ID NO：1第18458位核苷酸C→T的突变，使得其在此处形成终止密码。

本发明的第二方面，提供一种分离的核酸，它具有SEQ ID NO.1所示的序列，且第18458位为T，或者包括第18458位核苷酸的SEQ ID No.1所示序列的特异性片段。

进而本发明提供一种分子标记，其为上述SEQ ID No.1所述的核酸序列，或者所述的特异性片段，通过该分子标记，能够判断其是否存在白内障患病风险。

在本发明的第三方面，提供用于扩增包括上述多态位点的特异性引物。例如，该引物其长度为15-50bp，且特异性地杂交并扩增出含人CRYBB1基因的SEQ ID NO.1所示序列中第18458位核苷酸C→T突变。

在本发明的第四方面，提供一种可与上述SEQ ID No.1特异性杂交并检测所述多态位点寡核苷酸探针。例如，其长度为15-50bp，且特异性地杂交并检测含人CRYBB1基因的SEQ ID NO：1所示序列中第18458位核苷酸C→T突变。