[发明专利]生物材料及其用途

说明书

本申请是申请日为2006年12月8日，申请号为200680051213.0，题目为“生物材料及其用途”的分案申请。

本发明涉及与细胞凋亡诱导有关的分子和用于诱导细胞凋亡的药物组合物、方法及其用途。

目前，抗体不但是用于靶向癌症的选择性蛋白治疗剂，也用于治疗其他的症候(Brekke et al.Nat Rev Drug Discov 2003：2：52-62)。抗体工程的出现为从合成噬菌体文库中产生人抗体提供了工具。由于人源的性质和更好的多样性，其表现出了降低的免疫原性且增高的特异性和亲和性(Weiner et al.Nat Biotechnol 2005；23：556-7)。天然文库(library)特别引人注目，因为它们不依赖于新文库的免疫和重建，而可用于分离任何特异性的抗体，包括自身抗原(Griffiths et al.Embo J1993；12：725-34)。细胞表面受体目前组成了最成功的一类被当前治疗剂靶向的抗原，所述治疗剂包括小分子抑制剂和抗体。特别有意思的是细胞表面受体，其在靶细胞中独特表达或表现出增加的表达水平，并且另外能够向细胞中转死亡或生存信号。这种具有内在信号特性的、差异表达的受体使基于抗体靶向微生物感染的细胞、转化的细胞或其它的功能障碍的细胞成为可能。

对于肿瘤的治疗，能在靶标肿瘤细胞中诱导细胞凋亡但不伤害正常组织的抗体特别有用。几种此类单抗已经被使用，其已在美国食品和药品管理局登记并且为常规的癌症治疗如淋巴瘤(利妥昔单抗(rituximab)靶向CD20)或乳腺癌(妥珠单抗(trastuzumab)或西妥昔单抗(cetuximab)分别靶向Her-2和EGFR)提供了替代。

目前，在临床研究中，也存在其他的具有细胞凋亡诱导作用的抗体。然而，即便这些抗体在患者或者动物试验中显示有益作用，但仍然存在未能满足的临床需要。

靶向B细胞肿瘤的抗独特型的免疫球蛋白是第一个实施于人的单克隆抗体治疗(Miller et al.N Engl J Med 1982；306：517-22)。已经表明通过被动抗体施用(Riechmann et al.Nature 1988；332：323-7)或者用患者自身的肿瘤免疫球蛋白的主动接种(Kwak et al.N Engl J Med 1992；327：1209-15)方法的肿瘤细胞破坏，赋予患有不同类型B细胞恶性肿瘤的患者肿瘤消退(tumour regression)或肿瘤休眠(tumour dormancy)。最近的一篇文献描述了使用转基因小鼠产生完全的人抗独特型抗体(Suarez et al.MoI Immunol 2004；41：519-26)，该小鼠在产生小鼠抗体和表达选择的人抗体链式基因座(human antibody chain loci)方面是有缺陷的。

在本发明中，使用了竞争生物淘洗(competition biopanning)法，其中将全细胞形式的靶细胞抗原和膜囊(membrance vesicles)形式的过量相减细胞抗原(excess subtractor cell antigen)同时暴露于天然的抗体噬菌体文库(WO 2004/023140；Soderlind et al.Nat Biotechnol 2000；18：852-6)，以重新得到并随后试验具有良好的B淋巴瘤靶细胞选择性的抗体片段。而且，试验的抗体在靶细胞但不是在非靶细胞中诱导细胞凋亡的能力，证明了所选择的结合分子的功能性。

鉴定的特异性抗体包括HLA-DR/DP(本发明的B1抗体)和表面IgM(本发明的C11抗体)，以及ICAM-1(本发明的B11抗体)，其是以前与细胞凋亡诱导无关的粘附分子。分离的抗体在亚纳摩尔(subnanomolar)到纳摩尔(nanomolar)的范围内都具有亲和性，直接使他们成为用于靶向抗体治疗法的可能的选择。

发明概述

一方面，本发明提供了在靶细胞中诱导细胞凋亡的方法，其包括下列步骤：

a.提供一种或多种展示细胞表面抗原ICAM-1的靶细胞；

b.提供一种或多种结合分子，其选择性地与细胞表面ICAM-1结合，且一旦结合ICAM-1，则诱导靶细胞的细胞凋亡；

c.将(a)的靶细胞暴露于(b)的结合法分子中，诱导靶细胞的细胞凋亡。

优选，结合分子是抗体分子。

第二方面，本发明提供了在靶细胞中诱导细胞凋亡的方法，其包括下列步骤：

a.提供一种或多种展示细胞表面抗原HLA-DR/DP和/或表面IgM的靶细胞；