[发明专利]鸡新城疫血凝抑制试验用阳性血清国家标准品及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及鸡新城疫血凝抑制试验用阳性血清国家标准品及其制备方法，属于标准物质技术和兽用生物制品技术领域。

背景技术

鸡新城疫(ND)又称亚洲鸡瘟，是由禽副流感病毒型新城疫病毒(NDV)引起的一种主要侵害鸡、火鸡、野禽及观赏鸟类的高度接触传染性、致死性疾病，其感染呈全球趋势，给世界上很多国家和地区带来了严重的经济损失。世界动物卫生组织(OIE)将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。目前，红细胞凝集抑制(HI)试验是鸡新城疫诊断的常用方法，为了促进鸡新城疫诊断试验的国际一体化和抗原标准化，英国卫桥Veterinary Laboratories Agency(VLA)于1966年研制出国际标准血清(可从National Institute for Biological Standards and Control(NIBSC)获得)，也称之为基准标准品，各国实验室用国际标准品溯源制备各自的国家标准品，用于标定鸡新城疫HI试验。目前，可从NIBSC获得的鸡新城疫血凝抑制试验阳性血清国际标准品是通过鸡新城疫嗜内脏型强毒Herts33株病毒免疫SPF鸡后制备完成的(WHO International Standard：The 1st International Reference Preparation for anti-Newcastle disease serum.NIBSC code：NDS，Instructions for use(Version 3.0，Dated 18/03/2008))。本发明是通过鸡新城疫弱毒La Sota株病毒和灭活疫苗免疫SPF鸡后制备完成的，使得安全性更好。而且，标准品的质量要求高，制备方法和检验或标定方法严格，有关的制备程序和标定方法至今未见报道。

发明内容

本发明的目的是以NIBSC获得的鸡新城疫血凝抑制试验用阳性血清国际标准品为溯源，建立一批国家级鸡新城疫血凝抑制试验用阳性血清标准品，用于标定我国的鸡新城疫红细胞凝集抑制试验。

本发明是通过以下技术路线来实现的：

(1)是通过鸡La Sota株新城疫病毒和新城疫灭活疫苗免疫SPF鸡制备高免血清当抗体水体满足要求时采用无菌心脏采血法取血、分离血清、加入抗生素，备用；

(2)阳性血清国家标准品候选物的选择和制备

用红细胞凝集抑制试验的方法，对被检阳性血清分别进行测定，若连续重复测定3次以上，试验结果完全一致，且阳性血清的HI效价达1∶5120倍以上则该阳性血清即可作为；

以鸡新城疫阴性血清将鸡新城疫阳性血清国家标准品的候选物稀释成与鸡新城疫血凝抑制试验用阳性血清国际标准品的效价一致；

候选物经0.4μm和0.22μm无菌滤膜过滤、精确分装至1mL灭菌长安瓿，分装精度为±0.01mL，按常规方法冻干后抽真空、熔封；

(3)标准品的检验

1)物理性状、无菌检验、真空度测定、剩余水分测定按《中华人民共和国兽用生物制品规程》(中华人民共和国农业部.中华人民共和国兽用生物制品规程二○○○年版.化学工业出版社，2001，本发明以下简称《规程》)和《中华人民共和国兽药典》(中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典2005年版三部，中国农业出版社，2005，本发明以下简称《中国兽药典》)规定方法进行，并符合其规定；

2)效价测定随机抽取规定数量的样品用阳性血清国际标准品为参比进行HI试验测定其效价；

3)均一性检验随机抽取规定数量的样品，用阳性血清国际标准品作参比进行HI试验测定其效价，试验结果应一致；

4)稳定性试验检查在37℃下，样品放置的时间，并以此数据作为依据，为下一批稳定性试验作基础；

5)协作标定定值选择3个以上具有对鸡新城疫HI试验富有经验的实验室，每个实验室用3个样品，每个样品重复2次，同时用国际标准品做参比，各协作标定单位按照协作标定方案的要求进行标定；

并将实验结果交给组织单位进行整理后确定协作标定数值；

通过协作标定结果，计算出1mL鸡新城疫血凝抑制试验用阳性血清国家标准品的国际单位含量，以此作为国家标准品的确定值。

本发明的详细描述

一、鸡新城疫血凝抑制试验用阳性血清国家标准品候选物的制备

选取鸡新城疫HI抗体为阴性的SPF鸡后，以La Sota株鸡新城疫病毒和鸡新城疫灭活疫苗作为免疫抗原对鸡进行免疫，第一次用病毒抗原，第二次和第三次用灭活疫苗按照表1免疫程序进行免疫。