[发明专利]一种寡肽D及其抗菌应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗菌肽及其应用，尤其涉及一种寡肽D及其抗菌应用，属生物医学技术领域。

背景技术

目前，因抗菌药物的泛滥使用，产生了一些新的问题，如出现的相应耐药性致病株，即产生了细菌的耐药性，而致病菌的耐药性已经日益严重地威胁着人类的健康和疾病临床治疗。因此，寻找全新类型的抗菌药物已成为解决耐药性问题又一对策。

抗菌肽是指分布于生物体内具有抵御外界微生物侵害、清除体内突变细胞的一类小分子多肽，根据肽中氨基酸的数量的不同，一般将由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽，同理类推还有三肽、四肽、五肽等，一直到九肽；也有文献把由2～10个氨基酸组成的肽称为寡肽；或称为短肽。与抗生素不同，抗菌肽是特定基因编码的产物，它通过破坏细胞膜通透性使细胞内容物外流，最终导致细菌死亡。因此它不会使细菌产生抗药性，因而避免了超级细菌的产生。

近年来，肽在人体中的作用已引起科学界的高度重视。随着医学及生化技术的发展，多肽类药物将成为21世纪重要的诊断、监测、预防和治疗药。因此，针对日益突出的细菌的耐药性问题，开发具有显著抑菌活性的寡肽即多肽药物，具有重要意义。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种寡肽D及其抗菌应用。

本发明所述的寡肽D，其特征在于：寡肽D是SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，具体是：Gly Ala Val Leu Lys Val Leu Lys。

本发明所述寡肽D在制备抗细菌药物中的应用。

本发明提供的寡肽D具有显著的抑菌功能，同时对正常细胞无毒性。

功能实验显示：本发明所述寡肽D抗菌谱广，对革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌抑菌效果明显，且对真菌的抑制作用也很显著，其抑菌效果与革兰氏阴性菌类似。提示其在抗菌药物开发和应用方面有重要价值。

进一步的功能实验显示：本发明的寡肽D对细菌的抑制作用在20min之内就开始发挥，45min后抑制率即可达75％以上，90min后就可达到90％以上。本发明的寡肽D不仅抗菌作用强，而且稳定性好，在100℃煮沸10min后，不仅活性还能保持80％，而且在酸、碱的环境中还能发挥其良好的抑菌作用。

本发明提供的寡肽D合成方便，且不需任何修饰连接即具有抑菌功能，同时对正常细胞无毒性，为抗细菌药物的开发提供了基础。

鉴于上述寡肽D的性质和功能，本领域普通技术人员可以利用分子生物学技术，根据氨基酸与密码子的对应关系反推出核酸序列作为功能基因，用于制备转基因动物或植物以表达功能蛋白，以进一步用于药物的开发和临床治疗。

具体实施方式

实施例1

本发明所述寡肽D的设计与合成

1、依据目前国际主要抗菌肽数据库(http://www.imtech.res.in/raghava/antibp/；http://aps.unmc.edu/AP/main.php；http://www.bbcm.univ.trieste.it/；http://penbase.immunaqua.com/)中登陆的抗菌肽的序列，分析其一级结构与活性的对应关系，设计人工寡肽序列。

2、利用蛋白质分析数据库http://www.expasy.org/分析已知活性的多肽序列与设计的寡肽序列的二级结构的相似度，结合其它物理化学参数预测进行设计序列的修正。

3、将设计的人工寡肽序列送至生物公司合成或利用自动多肽合成仪合成序列。HPLC检测纯度要大于96％，同时通过质谱检测确定多肽合成质量。样品以冻干状态保存。

4、对合成后的寡肽进行抑菌功能检测筛选。

5、通过功能检测，最终获得具有抑菌功能的寡肽序列，命名为寡肽D，其氨基酸序列具体是：Gly Ala Val Leu Lys Val Leu Lys。

实施例2

利用液体生长抑制法检测本发明所述寡肽D的抑菌活性

2.1材料、试剂

1)本发明所述寡肽D由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，氨苄青霉素(Amp)为solarbio公司产品，一次性滤器，为美国PALL公司产品，其它药品试剂为国产分析纯。