[发明专利]一种菌物孢子萌发载膜及其制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种菌物孢子萌发载膜及其制备方法。用于食品、粮食、环境微生物检测、商品检验检疫、药物、农药和农业等的菌物孢子萌发试验。

背景技术

菌物（fungi），原统称真菌，是一类与人类社会关系密切的真核微生物，既可用来制造药物、食物、工业原料等，又可引起人、动物、植物的传染病。菌物孢子萌发试验是研究菌物的一项常用技术。菌物的种类鉴定，菌种选育、遗传和变异的研究，生存、繁殖和种群扩散能力，抗逆性，与其他生物之间的相互关系，有害菌物防除技术的研究等，都必须进行孢子萌发试验。孢子萌发试验时，一般是用水将孢子配成悬浮液，将孢子悬浮液滴注在透光性好、便于进行显微镜下观察、成分稳定的载物上，再置于试验设计的条件下进行。常用于孢子萌发试验的悬浮液载物有：凹玻片、置于皮氏培养皿中或滴注在载玻片上的水琼脂凝胶平板、滴注在载玻片上的火棉胶载膜。

琼脂（agar），是一种由红藻提出的海藻多糖，广泛用作微生物培养的凝固剂，无臭，味淡，不溶于40 ℃以下冷水和无机、有机溶剂中，可溶解于85 ℃以上热水，显中性反应，放冷至室温则形成凝胶。在显微镜下观察，琼脂水凝胶为无色的不规则多角形黏液质片。相较于常用的载玻片，以琼脂水凝胶作为基质的载膜，能使孢子水悬浮液在面上完全铺展，兼有一定的保湿功能。单纯采用琼脂水凝胶为载膜，若成批制作，载膜干燥后易破碎，使用不便；若使用前在面积较小的载玻片上直接制作，费料、费时、费工；载膜干、湿状态下厚度相差5~10倍（视琼脂含量不同而有差别），使用湿膜因琼脂水凝胶在玻片上表面张力较大不易制作成达到观察需要的薄度，太厚则影响透光性；使用干膜则因琼脂水凝胶摊成薄层至干燥时间长（需要24小时或以上，时间长短因制作处温度、湿度不同而异），必须使琼脂水凝胶在载玻片上放置较长时间，管理麻烦，不慎易引起膜破裂或飘进杂物。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种菌物孢子萌发载膜及其制作方法。本发明制作的载膜较薄，不易破碎，孢子悬浮液能方便在其上铺展成较薄液层，故透光性好不影响菌物孢子萌发状态的观察，适宜作为各种菌物孢子配制成悬浮液后进行萌发试验的悬浮液载物，且制作简单、使用方便。

本发明的技术方案如下所述：

本发明的一种菌物孢子萌发载膜，其组成物为琼脂、水溶性无机盐、吐温-20、水。

上述组成物的比例按质量百分数计为：琼脂0.8%~2.0%、水溶性无机盐1.0%~4.0%、吐温-20 0.05%~1.0%,余量为水。

组成物中的水溶性无机盐为钠盐、钾盐、铵盐中的一种或多种混合。

所述的菌物孢子萌发载膜的制作方法为，先使组成物中的琼脂、水溶性无机盐和吐温-20完全溶解在85 ℃以上热水中，待混合液降至50-60℃，将其倾注在表面光滑的耐热平板上，摊成均匀薄层，在室温下待其凝固后，用刀片切割成方形膜片，自然阴干、保存。

本发明的菌物孢子萌发载膜使用时，先在洁净的载玻片或相当器皿上滴上一滴水，稍微摊开，取出一张载膜摊在水滴上方。用吸水纸将载膜四周多余的水吸干。将菌物孢子悬浮液滴在载膜上方，并摊成均匀液层，进行孢子萌发试验。需要观察孢子萌发试验结果时，取出载玻片，将载玻片底部的水滴或雾层抹去后，置于显微镜下便可观察。

本发明采用的水溶性无机盐（water-soluble inorganic salts），主要是可溶于水的钠盐、钾盐、铵盐。琼脂水凝胶中加入适量的水溶性无机盐，可调节凝胶的酸碱平衡、改善膜制品的柔韧性。

采用的吐温-20（Tween-20），化学名称聚氧乙烯山梨糖醇单月桂酸（polyoxyethylene (20)sorbitan monolaurate），非离子型表面活性剂，可与水、乙醇、甲醇和乙酸乙酯等混溶，具有良好的助润湿作用。琼脂水凝胶中加入适量的吐温-20，制作过程中使琼脂液易于扩散成薄层，且可改善膜制品的柔韧性。

本发明人通过一系列的试验证明，以琼脂、水溶性无机盐和吐温-20为组成物制成的薄膜，较薄（干膜厚度0.2-0.4mm），不易破碎，干膜成品破碎率低于2%、使用过程破碎率低于5%；用作菌物孢子悬浮液萌发的载膜，孢子悬浮液能方便在其上铺展成较薄液层，可满足孢子萌发需氧要求高的菌物，孢子萌发整齐，透光性好、不影响菌物孢子萌发状态的观察；且具有制作方法简单、使用方便、制作过程和制成品对操作者和试验环境安全、易保存（室温保存于密封容器中的干载膜存放期能超过24个月）等优点。

附图说明

图1为番石榴炭疽病菌分生孢子萌发的芽管所产生的附着孢形态。