[发明专利]一种拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子的克隆方法

权利要求书

1.一种拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子的克隆方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

Ⅰ、获取拟南芥根特异性基因ARSK1：

A、分别从拟南芥植株中提取拟南芥根总RNA和拟南芥叶总RNA，再分别进行反转录PCR反应，分别扩增得到拟南芥根cNDA序列和拟南芥叶cNDA序列；

B、分别以所述的拟南芥根cNDA序列和拟南芥叶cNDA序列为模板，分别根据拟南芥根特异性基因设计引物，再分别进行半定量PCR反应，筛选得到拟南芥根特异性基因ARSK1；

Ⅱ、获取拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子：

A、在线分析得到拟南芥根特异性表达基因ARSK1的启动子，再在拟南芥根DNA中进行克隆得到所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子。

2.根据权利要求1所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子的克隆方法，其特征在于：

步骤Ⅰ-B中所述的拟南芥根特异性基因在拟南芥信息资源网站的编号分别为：AT1G79580.1、AT1G62980.1、AT1G66470.1、AT1G27740.1、AT1G54970.1、AT3G10710.1、AT1G12560.1、AT2G26420.1、AT1G12040.1、AT1G62440.1、AT3G62680.1、AT2G26290.1。

3.根据权利要求1所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子的克隆方法，其特征在于：所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子的序列为SEQ ID No：1。

4.根据权利要求1所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子的克隆方法，其特征在于：

在步骤Ⅱ之后，进行所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子功能验证，包括以下步骤：

A、在线分析得到所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子的转录起始位点、含有的顺势作用元件；

B. 将所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子进行5’端缺失处理，经过PCR反应得到ARSK1启动子缺失体片段；

C. 将所述的ARSK1启动子缺失体片段分别构建ARSK1启动子缺失体GUS表达载体；

D、将所述的ARSK1启动子缺失体GUS表达载体转化拟南芥植株，得到转化体植株，再进行检测。

5.根据权利要求4所述的拟南芥根特异性表达基因ARSK1启动子的克隆方法，其特征在于：所述的ARSK1启动子缺失体片段的大小分别为

1981bp， 1460bp， 879bp， 762bp， 409bp，358 bp。