[发明专利]Q热贝纳柯克斯体TaqMan荧光定量PCR检测方法

权利要求书

1.一种Q热贝纳柯克斯体Taqman荧光定量PCR检测用引物及探针，其上游引物为：5’-GGGGTAAAGTGATCTACAC-3’；下游引物为：5’-CCCATAAACGTCCGATAC-3’；探针为：5’-TCAGTATGTATCCACCGTAGCCA-3’；所述探针的5’端用报告荧光染料标记，3’端用淬灭荧光染料标记。

2.如权利要求1所述的引物及探针，其特征在于，所述的报告荧光染料为报告荧光染料FAM，淬灭荧光染料为淬灭荧光染料Eclipse。

3.一种含权利要求1或2所述引物及探针的检测试剂盒。

4.一种利用权利要求1或2所述的引物及探针检测Q热贝纳柯克斯体方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)目的基因的扩增

以Q热贝纳柯克斯体基因组DNA为模板，进行PCR反应，回收PCR扩增产物；

2)目的基因的克隆

将步骤1)的目的基因连接在pGEM-T easy载体上并转化至大肠杆菌感受态细胞，筛选阳性转化子，进行PCR检测并测序，提取阳性重组质粒，计算重组质粒的拷贝数；

3)Taqman荧光定量PCR检测

以阳性重组质粒DNA为模板，利用权利要求1所述引物及探针，进行Taqman荧光定量PCR检测。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述Taqman荧光PCR扩增条件为95℃预变性3min；然后采用二步法进行反应：95℃，15s；60.6℃，45s；收集荧光；共45个循环。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，引物用量为1μL，探针用量为0.5μL，引物和探针的终浓度分别为0.4μM和0.2μM。

7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)目的基因的扩增所用引物为：

上游引物：5’-CAATGAAATGGACCCACC-3’，

下游引物：5’-ATCGCGTATCTTTAACAGC-3’。