[发明专利]日本血吸虫SjSap重组抗原蛋白及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及分子、细胞生物学研究领域，具体涉及日本血吸虫含鞘脂激活蛋白B结构域蛋白(SjSap)的重组抗原蛋白及其制备方法。此外，本发明还涉及该日本血吸虫SjSap重组抗原蛋白在检测日本血吸虫病人血清抗体中的应用。

背景技术

血吸虫病(Schistosomiasis)是由血吸虫(Schistosoma)感染所引起的一种寄生虫病，广泛分布于非洲、中东、南美和东南亚的76个国家和地区。全球至少有2.4亿人受感染，7亿人受威胁，严重影响着人类的健康并阻碍流行区社会经济的发展。血吸虫病至今仍然是世界范围内的主要公共卫生问题之一；疫情严重的地区主要分布在非洲撒哈拉以南的国家，血吸虫感染的人数占全球总数的85％以上。全球每年死于血吸虫病的人数达28万。

血吸虫也称为裂体吸虫或住血吸虫，隶属于吸虫纲、复殖目、裂体科、裂体属。寄生于人体的血吸虫主要有6种，分别为曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)、日本血吸虫(S.japonicum)、埃及血吸虫(S.haematobium)、马来血吸虫(S.malayensis)、间插血吸虫(S.intercalatum)和湄公血吸虫(S.mekongi)。在世界范围内流行于感染人群的血吸虫有3种即曼氏血吸虫、日本血吸虫和埃及血吸虫。在我国仅有日本血吸虫病的流行，它是我国5种主要的寄生虫病之一。由于日本血吸虫感染所导致的病情最为严重，也是防治难度最大的。主要原因在于日本血吸虫动物宿主多；成虫存活时间长；感染后宿主的伴随免疫以及治愈后的免疫力差；中间宿主钉螺分布广泛且难以消灭等等。

在血吸虫感染宿主的过程中，尾蚴、童虫、成虫和虫卵均可对宿主造成损害。其主要原因是血吸虫不同的发育时期可以释放不同的抗原诱导宿主的免疫应答，这些特异性免疫应答的结果是一系列免疫病理变化的出现，日本血吸虫对终末宿主的主要危害是虫卵肉芽肿反应和肝纤维化。目前，普遍认为血吸虫病是一种免疫性的疾病；根据病程和临床症状，血吸虫病可分为急性、慢性和晚期三种。

诊断是确定血吸虫感染率以及感染度的有效手段。诊断不仅为流行区的划分提供判断标准，还为血吸虫病防治活动的各个环节提供必不可少的信息和科学依据，在防治工作中处于重要位置。无论从个体水平确定药物化疗的对象、考核化疗的效果，还是在群体水平监测血吸虫病疫情的变化、考核血吸虫病控制效果和评估流行趋势等等，均需要以诊断结果作为评判依据之一。

传统的病原学方法(粪便检查)是诊断血吸虫病最为经典和可靠的途径，是判断血吸虫感染与否的“金标准”。但是病原学方法工作强度大、诊断周期长，而且流行区人群的依从性逐年下降，收集病人粪便的难度不断增加。此外随着血吸虫病大规模防治规划的实施，流行区病人的感染度和感染率明显下降，病原学方法在血吸虫病低度流行区的敏感性有限，粪检查出病原的难度增大。因此，单纯依靠病原学的诊断方法已经不能适应大规模血吸虫病防治工作的需要。

免疫学的诊断方法具有操作简便、敏感性较高、特异性较好和流行区群众的依从性较高等优点，已逐渐为广大血防工作人员以及流行区群众所接受，并且在流行区化疗对象的大规模筛查、血清流行病学调查以及防治效果的评价等方面起到了极为重要的作用。目前，血吸虫病免疫诊断最常用的抗原是成虫和虫卵抗原，但抗原成分复杂，制备步骤繁琐，来源有限且不易质控，难以适应大规模现场疾病普查的需求。依靠基因工程方法生产的重组抗原分子可为现场推广应用提供大量的抗原材料，且成分明确、特异性好。

鞘脂激活蛋白(Saposin)是由其前体蛋白(Prosaposin)产生的热稳定性蛋白家族，包括鞘脂激活蛋白A、B、C、D。其功能是作为鞘脂糖水解途径中所涉及到的溶酶体酶的激活剂，参与带有短的寡糖链的脂类的代谢。四种鞘脂激活蛋白的结构相似，均有形成二硫键以稳定结构的6个半胱氨酸、一个糖基化位点以及同一位点的保守脯氨酸残基。鞘脂激活蛋白B(Saposin B)是最早被发现和研究的鞘脂激活蛋白，该蛋白可以活化芳香基硫酸酯酶A、α-半乳糖苷酶、酸性β-半乳糖苷酶等多种酶类，参与部分糖脂和甘油脂的代谢等，因此被认为是一种非特异性的激活蛋白。