[发明专利]液相芯片检测空肠弯曲菌的方法

权利要求书

1.一种液相芯片检测空肠弯曲菌的方法，其特征在于：由微球、捕获抗体、检测抗体、生物素标记的抗抗体、链霉亲和素-藻红蛋白组成，所述微球为羧基化的35号微球；所述捕获抗体是空肠弯曲菌单克隆抗体，所述检测抗体是空肠弯曲菌的多克隆抗体，生物素标记的抗抗体是经活化的生物素标记的羊抗兔IgG；所述捕获抗体和检测抗体均能特异与空肠弯曲菌结合，以红色激光激发其球型基质上的红色分类荧光，以绿色激光激发与生物素标记的抗抗体相结合的藻红蛋白，测定球型基质上结合的报告荧光分子的数量，用于间接确定球型基质上结合空肠弯曲菌的数量；

液相芯片的制备：捕获抗体与微球偶联形成偶联体

取微球原液室温恢复30min，用超声波清洗机进行超声10min，漩涡震荡30s，使微球均匀分布，用无菌水分别配制50mg/ml的EDC和NHS，然后取200ul 的微球原液置于1.5ml的离心管中，14000 rpm，离心5min，取出后弃上清，加入NHS和EDC各10ul，再加入80ul的活化缓冲液，混匀后，用铝箔纸包好，置于37℃摇床120 rpm，20min，然后14000 rpm，离心5min，小心移去上清，加入500ul稀释至250ug/ml的捕获抗体，重悬混匀，置于37℃摇床120 rpm，孵育2h，取出后离心弃上清，用500ul的PBS进行洗涤，洗涤后加入500ul 1％BSA的 PBS溶液，重悬微球，37℃水浴摇床孵育两个小时进行封闭，封闭后4℃保存；

液相芯片检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法

将已偶联的微球混合液室温恢复10min，漩涡振荡器震荡约3min，取约5000个微球，加入10⁸ CFU/ml 的空肠弯曲菌10ul，用PBS-TBN补足体积到100ul，置于37℃摇床120rpm，1h，取出后离心弃上清，用200ul PBS-TBN洗两次，加入已稀释的检测抗体10ul，用PBS-TBN补足体积到100ul，置于37℃摇床120rpm，1h，取出后离心，弃上清，用PBS-TBN洗两次，然后加入已稀释的生物素标记的羊抗兔IgG 10ul，用PBS-TBN补足体积到100ul，置于37℃摇床反应1h，取出后离心弃上清，用PBS-TBN洗两次，再加入SA-PE，用PBS-TBN补足体积到100ul，置于37℃摇床反应，取出后离心弃上清，用PBS-TBN洗涤两次，重悬于100ul PBS-TBN中，上机进行检测。