[发明专利]一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法

说明书

技术领域

本发明属于鱼类外周神经的染色领域，特别涉及一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法。

背景技术

神经系统对鱼类的生命活动很重要，它由脑、脑神经、脊髓与脊神经构成，脑和脊髓为中枢神经，脑神经与脊神经为外周神经；鱼类外周神经系统分布的研究可以为鱼类起源与进化及生理功能的研究提供重要依据。有关鱼类外周神经分布的研究方法报道国内尚未见到，国外相关报道主要集中在以下几个方面：苏木素神经染色法，该方法染色效果不佳；软骨、硬骨、神经三重染色法，主要过程首先用阿利新蓝将软骨染为蓝色，其次用茜素红将硬骨染为红色，最后外周神经经苏丹黑染色后，显黑色，染色效果良好，但该染色过程较为烦琐。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法，该方法操作简单、所需试剂少，大大缩短了染色时间，也无须昂贵的试剂和特殊的仪器。

本发明的一种鱼类仔稚幼鱼外周神经的染色方法，包括：

(1)用10vol％福尔马林固定鱼体标本48～54h，将固定好的鱼体标本冲洗12-24h；

(2)将上述鱼体放入容器中，加入0.5wt％KOH溶液直至将鱼体淹没，放置1-2h；

(3)向上述溶液中滴加浓度为3～4vol％H₂O₂溶液，将容器置于白炽灯下过夜，以加速褪去鱼表皮色素；

(4)对鱼体进行酒精脱水处理，依次放入30vol％、50vol％、70vol％酒精中，各30～40min；

(5)将鱼体浸入30wt％-50wt％苏丹黑溶液中进行神经染色，染色时间为8-12h；

(6)对鱼体进行酒精水化处理，依次放入70vol％、60vol％、50vol％酒精，各1-2min；

(7)将鱼体置于0.5wt％KOH溶液中过夜，即完成对外周神经的染色。

所述步骤(1)中的10vol％福尔马林由37vol％-40vol％甲醛溶液稀释而得。

所述步骤(1)中的鱼体标本为鱼类仔稚幼鱼标本。

所述步骤(2)中的容器为塑料或玻璃方形盒。

所述步骤(3)中每100ml KOH滴加4-6滴H₂O₂。

所述步骤(5)中的神经染色在摇床中进行，染色效果更佳。

所述步骤(5)中的30wt％-50wt％苏丹黑溶液配制工艺为：苏丹黑粉末溶解于70vol％酒精中，至饱和状态；用70vol％酒精稀释至30wt％-50wt％。

在0.5wt％KOH溶液中缓慢加入甘油，直至鱼体标本样品沉入底部，放置12h后，轻轻去除头部表皮，在体视镜下清晰可见外周神经分布，外周神经经过处理后染为黑色。

有益效果

(1)本发明操作简单、所需试剂少，大大缩短了染色时间，也无须昂贵的试剂和特殊的仪器；

(2)在本发明的操作中，KOH易溶于水和甘油，而且其化学性质类似NaOH，有强碱性，能破坏细胞组织；H₂O₂其水溶液俗称双氧水，外观为无色透明液体，是一种强氧化剂；KOH和H₂O₂结合使用能够使鱼体骨骼软化，消除肌肉组织，褪去表皮色素，使鱼体透明，便于观察鱼体外周神经染色情况；根据KOH易溶于甘油的特点，染色后鱼体放入KOH和甘油的混合液，不仅使鱼体透明便于神经染色观察，而且能够保持鱼体水分含量，隔绝空气，便于样品长期保存；

(3)本发明操作简便，结果稳定，可用于一般鱼类仔稚幼鱼外周神经分布的研究，其适用范围较广。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

(1)用10vol％福尔马林(由37vol％甲醛溶液稀释而得)固定中华鲟仔鱼标本(全长6.2cm)48h，将固定好的鱼体标本冲洗12h；

(2)将上述鱼体放入玻璃方形盒中，加入0.5wt％KOH溶液直至将鱼体淹没，放置1h；