[发明专利]新型脂肪酶

说明书

本申请是申请日为2006年12月8日、发明名称为“新型脂肪酶”的、申请号为200680046008.5的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及新型脂肪酶。本脂肪酶由Tetrasphaera属的新株的菌体产生。本脂肪酶可将中链脂肪酸及/或长链脂肪酸作为底物识别。本脂肪酶可通过阴离子交换树脂、疏水性树脂吸附固定，可作为固定化酶使用。本脂肪酶在消化药、芳香剂制造、临床检验试剂、洗涤剂用酶、油脂制造、农药·医药品的光学活性中间体制造等领域中有利用价值。

背景技术

已证明脂肪酶是在各种酯的合成和分解、酯交换、外消旋体的光学拆分时优异的生物催化剂，实际上已在消化药、芳香剂制造、临床检验试剂、洗涤剂用酶、油脂制造、农药·医药品的光学活性中间体制造上使用。

脂肪酶中众所周知的是动物的胰脂肪酶，而工业上经常使用的是主要来自微生物的脂肪酶。这些脂肪酶的大多数的基因已被克隆，氨基酸序列也已知(Candida rugosa：非专利文献1。Rhizopus delemar：非专利文献2。Bacillus subtilis：非专利文献3。Staphylococcus aureus：非专利文献4。Pseudomonas aeruginosa：非专利文献5)。

丝状菌、芽孢杆菌属(Bacillus)、葡萄球菌属(Stapylococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)等产生的脂肪酶已在工业上使用。这些脂肪酶基本上以高级脂肪酸(碳数为16以上的脂肪酸)作为底物，以短链脂肪酸(碳数6以下)作为底物的是酯酶。可充分识别中链脂肪酸，不仅显示水解活性，还显示酯化活性的脂肪酶还不为人所知。

中链脂肪酸结合的甘油三酯不仅被胰脂肪酶水解，还被胃脂肪酶水解，在甘油三酯的消化·吸收上也显示优势(非专利文献6)。且中链脂肪酸被吸收后，在小肠的肠道细胞中很少再合成甘油三酯，而是从门静脉运送到肝脏，作为能量燃烧。另一方面，高级脂肪酸在肠道细胞中再合成，由淋巴吸收运送到肝脏，有时作为脂肪积累。即，高级脂肪酸有体内积累性，中链脂肪酸无积累性。这样，通过中链脂肪酸甘油三酯和通常的食用油脂之间的酯交换来制造有益于健康的油旨。

非专利文献1 Kawaguchi et al.，Nature，341，164-166(1989)

非专利文献2 Haas et al.，Gene，109，107-113(1991)

非专利文献3 Dartois et al.，B.B.A.，1131，253-260(1992)

非专利文献4 Lee et al.，J.Bacteriol.，164，288-293(1985)

非专利文献5 Wohlfarth et al.，J.General Microbiology，138，1325-1335，(1992)

非专利文献6 I.Ikeda，Y.Tomari，M.Sugano，S.Watanabe，and J.Nagata：Lipids，26，369-373(1991)

发明内容

但是，至今为止在工业上用脂肪酶还未制造出非甘油三酯的中链脂肪酸酯。因中链脂肪酸无脂肪积累性，所以，用中链脂肪酸酯化的食品材料成为不易产生肥胖等问题的材料。

本发明者对脂肪酶进行了锐意研究，且从Tetrasphaera属新株的菌体培养上清中分离·精制出分子量约为32kDa及约为40kDa的新型脂肪酶，且进一步发现这些脂肪酶是以中链脂肪酸作为底物充分识别的新型物质，从而完成了本发明。

I.新型脂肪酶

本发明提供如下多核苷酸，其是编码属于Tetrasphaera属(优选与Tetrasphaera属NITE P-154菌株属于同种，更优选为Tetrasphaera属NITEP-154菌株)的菌产生的、分子量约为32kDa的脂肪酶的多核苷酸或其同源物，即含有下述(A₁)、(B₁)、(C₁)、(D₁)、(E₁)、(F₁)或(G₁)的多核苷酸：

(A₁)多核苷酸，其由序列号：10中记载的碱基序列的全部或至少包含25～801位的碱基序列的部分组成；