[发明专利]一种利用实时定量反转录PCR监测IVF胚胎培养液质量的反转录反应体系

权利要求书

1.一种利用实时定量反转录PCR监测IVF胚胎培养液质量的反转录反应体系，所述监测方法是利用实时定量反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达来进行IVF胚胎培养液的质量监测，所述反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达方法包括步骤：

标本收集及纯化；

反转录反应；

反转录阴性对照和阳性对照；

反转录产物进行实时定量PCR检测；

使用组织细胞RNA进行优化PCR条件；

在该条件下同时放大扩增阴性对照和阳性对照；

采用相对定量的方法检测目的基因的表达量；以及

进行统计学分析；

其特征在于，所述反转录反应体系为：模板1.3μl，反转录酶2.5U，随机引物2.5μM，dNTPs 0.5μM，Mg++4mM，RNase抑制剂0.2U，10x PCR缓冲液0.4μl，加Milli Q超纯水至终体积4μl。

2.如权利要求2所述的利用实时定量反转录PCR监测IVF胚胎培养液质量的反转录反应体系，其中所述反转录反应的反应条件为：25℃下10分钟，然后42℃下2分钟；然后在99℃下2分钟以及4℃下10分钟。

3.如权利要求1所述的利用实时定量反转录PCR监测IVF胚胎培养液质量的反转录反应体系，其中所述标本收集及纯化的步骤包括：

临床常规收集标本，经过至少三次预冷的PBS洗涤，通过超细的玻璃吸管将单个受精卵或植入前胚胎或胚胎细胞，总容量为0.1μL，转移到0.9μL的RNA抽提液当中，经过液态氮处理后收集全部RNA；所述抽提液为1xPCR缓冲液中加入0.1IU RNA酶抑制剂。

4.如权利要求3所述的IVF胚胎培养液的质量监测方法，其中所述标本收集及纯化的步骤包括：

将收集的RNA用RQ1RNase-Free DNase Kit进一步纯化，每个胚胎或胚胎细胞RNA用0.1IU RQ1RNase-Free DNase，加0.1μL的缓冲液；经过37℃下10分钟，加0.1μL终止液，95℃下1分钟。