[发明专利]一种造血嵌合体实时定量PCR检测及其遗传标记设计引物的方法

权利要求书

1.一种造血嵌合体的实时定量PCR检测中遗传标记设计引物的方法，用以选择可以区分受体和供体的特异性多态性遗传标记来设计引物，所述方法为：以包括含有至少两个以上连续的碱基不同的等位基因多态性为选择标准来选择12个多态性遗传标记。

2.如权利要求1所述的造血嵌合体的实时定量PCR检测中遗传标记设计引物的方法，其中，进一步包括用软件Prime 3来设计引物，针对每个等位基因多态性标记，设计两对引物，其中一个针对两个等位基因的共同位点，一个针对独特的多态位点。

3.一种利用荧光染料SYBR green进行造血嵌合体的实时定量PCR检测方法，包括如下步骤：

S1.收集标本；

S2.根据如权利要求1或2所述的方法选择多态性遗传标记设计引物和探针；

S3.实时定量PCR检测造血嵌合体；

S4.人工合成12个不同稀释浓度的造血嵌合体；以及

S5.统计学分析。

4.如权利要求3所述的造血嵌合体的实时定量PCR检测方法，其中，所述步骤S1中，包括：

通过临床采集供体和受体移植之前和移植后一个月的血样；

用常规方法从中直接提取基因组DNA；以及

用分光光度仪测量DNA浓度，而后存储备用。

5.如权利要求3所述的造血嵌合体的实时定量PCR检测方法，其中，所述步骤S2中，利用TaqMan probe探针进行实时定量PCR检测时所述TaqMan probe探针被选定在两个等位基因之间；然后对每个PCR产物进行熔解曲线分析。

6.如权利要求4所述的造血嵌合体的实时定量PCR检测方法，其中，所述步骤S3的实时定量PCR检测造血嵌合体，其中利用SYBRgreen和TaqMan probe的实时定量PCR检测反应体系，每个反应20微升，在Rotor gene3000荧光定量PCR仪中进行。

7.如权利要求3所述的造血嵌合体的实时定量PCR检测方法，其中，所述步骤S4中，是利用供体DNA来稀释受体DNA或受体DNA来稀释供体DNA进行人工合成12个不同稀释浓度的造血嵌合体。

8.如权利要求7所述的造血嵌合体的实时定量PCR检测方法，其中，所述人工合成12个不同稀释浓度的造血嵌合体的浓度从0.01％至100％。