[发明专利]一种富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种富勒烯衍生物的制备方法。

背景技术

现代自由基生物学和医学研究表明，许多疾病的病理过程都与生物体系中的活性氧自由基(ROS)及其所处的平衡状态有关。在生命活动的氧化代谢过程中不断产生各种自由基。研究表明，这些自由基与机体的许多功能障碍和疾病的发生，如吞噬、解毒、炎症、衰老、肿瘤、辐射损伤等有着密切关系。在各种活性氧自由基中，超氧阴离子自由基(O₂^-·)、羟基自由基(·OH)是一类重要的自由基，·OH是生物体中反应活性很高的活性氧自由基，O₂^-·则是体内其它活性氧的主要来源，它经过一系列反应可以生成其它氧自由基。因此，寻找能有效清除·OH、O₂^-·的抗氧化剂具有十分重要的意义。富勒烯及其衍生物由于具有缺电子多烯的结构特点，容易与自由基发生多加成反应，是活性氧自由基的良好捕获剂，也是导致富勒烯衍生物具有良好生物活性(神经细胞保护、抑制凋亡、自由基清除)的直接原因。

但是现有的富勒烯衍生物存在水溶解性差、毒性较高及自由基清除效率较低的问题，因而影响了富勒烯衍生物在生物学领域的应用。

发明内容

本发明要解决现有的富勒烯衍生物存在水溶解性差、毒性较高及自由基清除效率较低的问题，而提供一种富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的制备方法。

一种富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物的制备方法，具体是按以下步骤进行的：一、制备N-羟甲基乙酰胺：首先将乙酰胺、多聚甲醛和碳酸钾混合均匀，然后在95℃～100℃加热至全部融化，融化后继续在95℃～100℃下加热反应1h～3h，冷至45℃～55℃后即得到反应混合物溶液，然后加入浓度为8mol/L～12mol/L的KOH溶液，并搅拌均匀，然后在温度为0℃～4℃下静置12h～24h，最后过滤干燥即得到N-羟甲基乙酰胺固体；二、制备N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽：将还原型谷胱甘肽和步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺完全溶解于去离子水中，然后在冰浴的条件下加入pH为0.5的盐酸溶液，转移至在室温下反应12h～48h，并在温度为60℃～80℃下真空干燥至恒重，即得到反应产物，采用无水乙醇将反应产物洗涤1～3次，然后洗涤后的反应产物完全溶解于甲醇中，并加入无水乙醚至浊点，然后置于温度为0℃～4℃下静置12h～24h，最后离心分离并干燥，即得到N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽；三、制备富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物：将步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽和NaOH溶解于去离子水中，然后在频率为35kHz～45kHz的超声波辅助下逐滴加入醇溶剂，继续在搅拌速度为100转/min～500转/min下加入富勒烯的甲苯溶液，并在30℃～80℃的氮气保护下反应1～3天，然后加入蒸馏水混合均匀，并分离得到水相混合物，采用甲苯进行萃取除杂，共萃取1～3次，然后采用凝胶色谱法，以葡聚糖凝胶G-25为填料，用重蒸水进行洗脱，收集5min～25min内的洗脱液，经干燥后即得到富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物；四、制备成品：首先将步骤三制备的富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物配置成浓度为0.1mmol/L～2mmol/L的富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物水溶液，采用HCl溶液将富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物水溶液的pH调节至3.5～4.5，然后在搅拌速度为100转/min～500转/min加入醋酸汞，采用HCl溶液重新将pH调节至3.5～4.5，并在搅拌速度为100转/min～500转/min的室温下反应1h～4h，得到酸性反应产物，然后向酸性反应产物中通入硫化氢，并在通入硫化氢的条件下反应0.5h～2h，最后经过滤得到滤液，将滤液浓缩干燥即得到富勒烯还原型谷胱甘肽衍生物；步骤一中所述的乙酰胺与多聚甲醛的质量比为1∶(0.5～6)；步骤一中所述的碳酸钾与多聚甲醛的质量比为1∶(6～240)；步骤一中所述加入的浓度为8mol/L～12mol/L的KOH溶液与反应混合物溶液的体积比为1∶(30～600)；步骤二中所述的步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺与还原型谷胱甘肽的质量比为1∶(0.6～9)；步骤二中所述的步骤一制备的N-羟甲基乙酰胺与去离子水的质量比为1∶(2～100)；步骤二中加入的pH为0.5的盐酸溶液与去离子水的体积比为1∶(2.5～100)；步骤二中所述的洗涤后的反应产物与甲醇的质量比为1∶(1～5)；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与NaOH的摩尔比为1∶(1～5)；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与去离子水的质量比为1∶(5～50)；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与醇溶剂的质量比为1∶(50～500)；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与富勒烯的甲苯溶液的质量比为1∶(50～1000)；步骤三中所述的步骤二制备的N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽与蒸馏水的质量比为1∶(15～150)；步骤四中加入的醋酸汞与富勒烯N-羟甲基乙酰胺-还原型谷胱甘肽衍生物的摩尔比为1∶(0.2～1)。