[发明专利]一种铁皮石斛组培苗的细胞组织培养繁育方法

权利要求书

1.一种铁皮石斛组培苗的细胞组织培养繁育方法，其特征是按如下步骤进行：

（1）母株处理：选择目标铁皮石斛植株，用纯净水清洗干净，去除叶片，将植株外层鞘皮剥离干净；

（2）浸泡消毒：在洁净室超净工作台上将植株放入浓度0.1%的升汞溶液中浸泡消毒15min；

（3）清洗切段：消毒结束取出植株，用无菌水冲洗干净，用无菌手术刀将植株切为每段长2.0-3.0cm的植株段；

（4）诱导愈伤组织：将上述植株段接种在愈伤组织培养基上，在温度20-28℃、湿度30%-45%、光照度1800-2000Lx和每天光照8-12h的环境下进行培养45-90天，直至愈伤组织长出为止；

（5）愈伤组织碾碎：用无菌手术刀在超净工作台上将愈伤组织切下，用无菌镊子碾碎分散；

（6）摇床培养：将碾碎的愈伤组织放入细胞培养液中置于摇床上常温培养15-25天；

（7）圆球茎培养：将细胞培养液中增殖出的细胞接种于圆球茎培养基上，在温度20-28℃、湿度30%-45%、光照度1800-2000Lx和每天光照8-12h的环境下进行培养45-60天，直至圆球茎长出；

（8）分化苗培养：将培养出的圆球茎，均匀接种在分化苗培养基上，在温度20-28℃、湿度30%-45%、光照度2000-2200Lx和每天光照8-12h的环境下进行培养40-60天，直至分化苗长出；

（9）小苗培养：将培养出的分化苗均匀接种在小苗培养基上，在温度20-28℃、湿度30%-45%、光照度2000-2200Lx和每天光照8-12h的环境下进行培养40-60天，直至小苗长出；

（10）大苗培养：将培养出的小苗均匀接种在大苗培养基上，在温度20-28℃、湿度30%-45%、光照度2000-2500Lx和每天光照8-12h的环境下培养50-90天，瓶苗生根，至2-4条根/株时，瓶苗出瓶炼苗。

2.如权利要求1所述的一种铁皮石斛组培苗的细胞组织培养繁育方法，其特征是：步骤（4）愈伤组织培养基配方，（以1L计）为：1/2MS+20g白砂糖+5g琼脂+5.0mg 6-BA+0.5mg NAA。

3.如权利要求1所述的一种铁皮石斛组培苗的培养繁育方法，其特征是：步骤（6）细胞培养液配方（以1L计）为：1/2MS+20 g白砂糖+5.0mg 6-BA+0.5mg NAA。

4.如权利要求1所述的一种铁皮石斛组培苗的培养繁育方法，其特征是：步骤（7）圆球茎培养基配方（以1L计）为：1/2MS+4.0mg 6-BA + 0.4mg NAA +50g土豆+50g香蕉+25 g白砂糖+5g琼脂。

5.如权利要求1所述的一种铁皮石斛组培苗的培养繁育方法，其特征是：步骤（8）分化苗培养基配方（以1L计）为：1/2MS+3.0mg 6-BA +50g土豆+50g香蕉+25 g白砂糖+5g琼脂。

6.如权利要求1所述的一种铁皮石斛组培苗的培养繁育方法，其特征是：步骤（9）小苗培养基配方（以1L计）：1/2MS+ 3.0mg 6-BA +0.3mg NAA +50g香蕉+50g土豆+25 g白砂糖+5g琼脂。

7.如权利要求1所述的一种铁皮石斛组培苗的培养繁育方法，其特征是：步骤（10）大苗培养基配方（以1L计）为：1/2MS+0.5mg NAA+50g土豆+50g香蕉+25g白砂糖+5g琼脂+1.0g活性炭。