[发明专利]小鼠脂肪干细胞培养液

说明书

[技术领域]

本发明涉及干细胞的培养液，尤其涉及一种小鼠脂肪干细胞培养液。

[背景技术]

脂肪干细胞具有多向分化的潜能，在体外可定向分化为脂肪、成骨、软骨、肝脏、心肌细胞等，在人源方面，相比于骨髓干细胞，其具有取材容易、获取量大、减少供体取材时痛苦的优点，因此在再生医学上具有重要的意义。

小鼠作为一个重要的模式动物，在基础研究方面有着广泛的应用，但是较好维持小鼠脂肪干细胞的体外长期培养却一直是个难题，虽然目前也有报道的培养液，但是除了基础成分外，额外添加的小因子成分复杂，有关文献报道其添加的小因子有表皮生长因子(EGF)、亚油酸-牛血清白蛋白、β-巯基乙醇、胰岛素、转铁蛋白、亚硒酸、血小板衍生因子(PDGF)等成分，而且造成了很高的成本。

[发明内容]

本发明要解决的技术问题是提供一种成分简单、成本较低的小鼠脂肪干细胞培养液。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是，一种小鼠脂肪干细胞培养液，其组成成分为：胎牛血清20％，青霉素100IU/ml，链霉素100μg/ml，L-谷氨酰胺2mmol/L，碱性成纤维细胞生长因子10ng/ml，维生素C 50μg/ml，DMEM/F12补足到100％。

在小鼠脂肪干细胞体外培养的过程中，常常遇到的问题是细胞在较低代数时即出现老化，综合影响老化的的相关因素，最终决定从以下两方面着手来改善这种状况：

第一个方面是促增殖。老化与增殖是两个相偏离的过程，若一种因子可以很好的促进细胞的增殖，那么在一定程度上也许会延缓细胞的老化，考虑到这一点，我们首先想到的是添加碱性成纤维生长因子(bFGF)，人源bFGF是含155个氨基酸的促有丝分裂的阳离子多肽，是重要的促有丝分裂因子，也是形态发生和分化的诱导因子，体外作用十分强烈，对成纤维细胞、骨细胞、软骨细胞、血管内皮细胞、肾上腺皮质和髓质细胞、神经元和神经胶质细胞等具有很强的促细胞分裂增殖活性，因此认为其对脂肪干细胞的增殖也有很好的促进作用。

其次便是提高血清浓度，血清浓度的提高在一定程度上也能促进细胞的增殖，但是血清浓度要把握得当，否则易造成细胞的分化，不利于细胞干性的维持。

第二个方面是抗氧化。氧化损伤在细胞的老化中起着重要的作用，为此想到了添加抗氧化剂，在细胞培养方面常用的是β-巯基乙醇，但是借鉴中科院广州生物医药与健康研究院裴端卿教授2010年在细胞生物学知名杂志Cell stemcell上发表的《Vitamin C Enhances the Generation of Mouse and Human InducedPluripotent Stem Cells》文章，我们想到维生素C在干细胞培养方面所起的作用可能不仅仅是抗氧化如此简单，还有一些“未知”的机制在干细胞培养方面起着重要的作用，考虑到这一点，我们放弃β-巯基乙醇而选择了维生素C，同时对其有效浓度也做了探索，这也是与之前报道的体系中在抗氧化剂的选择方面最主要的差别。

本发明的有益效果是：

1.培养液成分简单、成本低。

2.能够有效维持小鼠脂肪干细胞在体外的长期增殖

3.能够很好的维持脂肪干细胞的生物学特性。

[具体实施方式]

本实施例按以下步骤对小鼠脂肪干细胞培养液进行筛选试验。

一、在相同的分离条件下，分别用高糖培养基、低糖培养基和小鼠胚胎干细胞培养基培养原代分离的细胞。

配方分别如下：

(1)高糖培养基(50ml)