[发明专利]一种预示和鉴定绵羊毛纤维直径的分子标记选择方法

权利要求书

1.一种预示和鉴定绵羊毛纤维直径的分子标记选择方法，其特征主要包括以下步骤：

（1）根据绵羊KAP1.1基因序列设计一对引物：

KF1: <210>1，

KR1: <210>2；

（2）从绵羊血液中提取基因组DNA，利用该引物对绵羊的基因组DNA进行PCR扩增；

（3）使用聚丙烯酰胺凝胶对PCR产物进行电泳分离，检测出KAP1.1基因外显子中的60bp和30bp插入 / 缺失的变异位点；

（4）多态性分析：当绵羊KAP1.1基因外显子缺失60bp时，PCR扩增片段长度为281bp，将其命名为CC基因型；当绵羊KAP1.1基因外显子缺失30bp时，PCR扩增片段长度为311bp，将其命名为BB基因型；当绵羊KAP1.1基因外显子含有60bp和30bp插入时，PCR扩增片段长度为341bp，将其命名为AA基因型；该位点杂合的个体PCR扩增产物为两条带，分别为341bp和311bp，将其命名为AB基因型；341bp和281bp，将其命名为AC基因型；311bp和281bp，将其命名为BC基因型，具有BB基因型绵羊的平均毛纤维直径显著小于具有AA、BC、AC、AB和CC基因型绵羊的平均毛纤维直径。

2.如权利要求1所述的预示和鉴定绵羊毛纤维直径的分子标记选择方法，其特征是：其中用于分析多态性的位点选自绵羊KAP1.1基因如下序列中的60个和30个碱基的插入/缺失，

1 caaccctcct ctcaacccaa ctcctgacac catggcctgc tgttccacca gcttctgtgg

       61 atttcccatc tgttccactg gtgggacctg tggctccagt ccctgccagc agacctgctg

      121 ccagaccagc tgctgccagc caacctccat ccagaccagc tgctgccagc caacttccat

      181 ccagaccagc tgctgccaac cga(tctccat ccagaccagc tgctgccagc caa)cctccat

      241 ccagaccagc tgctgccagc caacctgcct ccagaccagt ggctgtgaga cgggctgtgg

      301 cattggtggc agcattggct atggccaggt gggtagcagc g，

以上序列下划线部分为60个碱基的插入/缺失，在括号内的划线部分为30个碱基的插入/缺失。

3.如权利要求1或2所述的预示和鉴定绵羊毛纤维直径的分子标记选择方法，其特征是：其中分析基因多态性的方法是通过检测碱基的插入/缺失而分类的基因型,其中用于分析基因多态性的部位是外显子。

4.如权利要求3所述的预示和鉴定绵羊毛纤维直径的分子标记选择方法，其特征是：其中用于分析基因多态性的部位是由KF1和KR1表示的引物扩增的部分外显子区。

5.如权利要求1或2所述的预示和鉴定绵羊毛纤维直径的分子标记选择方法，其特征是：其中用于聚丙烯酰胺凝胶电泳的丙烯酰胺凝胶浓度为12%或14%。

6.如权利要求3所述的预示和鉴定绵羊毛纤维直径的分子标记选择方法，其特征是：其中用于聚丙烯酰胺凝胶电泳的丙烯酰胺凝胶浓度为12%或14%。

7.如权利要求4所述的预示和鉴定绵羊毛纤维直径的分子标记选择方法，其特征是：其中用于聚丙烯酰胺凝胶电泳的丙烯酰胺凝胶浓度为12%或14%。

8.如权利要求1或2所述的预示和鉴定绵羊毛纤维直径的分子标记选择方法，其特征是所述的PCR扩增退火温度为65℃。

9.如权利要求4所述的预示和鉴定绵羊毛纤维直径的分子标记选择方法，其特征是所述的PCR扩增退火温度为65℃。

10.如权利要求7所述的预示和鉴定绵羊毛纤维直径的分子标记选择方法，其特征是所述的PCR扩增退火温度为65℃。