[发明专利]一种小麦×玉米远缘杂交生产小麦双单倍体的方法

权利要求书

1.一种小麦×玉米远缘杂交生产小麦双单倍体的方法，其特征在于：该方法包括下列步骤：

第一步，种植

将小麦、玉米分期种植，花期相遇；

第二步，单倍体诱导

用新鲜玉米花粉为小麦柱头授粉，形成受精卵，通过激素诱导，形成小麦单倍体幼胚；

第三步，单倍体胚的剥离

小麦单倍体幼胚经14-20天发育后，在解剖镜下进行剥胚，并根据胚的大小将胚分成大胚和小胚两部分：直径大于400                                                m的胚为大胚，直径小于等于400m的胚为小胚；

第四步，将小胚和大胚分别离体培养成单倍体苗

a、小胚离体培养

将小胚置于小胚培养基中室温暗培养9-11天，有新芽萌动后，转到基础培养基中，在室温和14h光照条件下，分化出芽、根及分蘖，

所述小胚培养基的配方为：

 1/2MS基本培养基与 B5维生素、    2,4-二氯苯氧乙酸 0.09-0.11mg/L、

甘氨酸 1.9-2.1mg/L                乳氨酸  550-650mg/L

糖  45-55g/L、                    琼脂 6.5-7.5g/ L，

且其pH值=5.8；

所述基础培养基的配方为：

1/2MS培养基，         糖  24-26g/L      琼脂 6.5-7.5g/L，

且其pH值=5.8；

b、大胚离体培养

将大胚接种在大胚培养基中培养7-20天，有新芽萌动后，在室温和14h光照条件下，分化出芽、根及分蘖，

所述大胚培养基配方为：

1/2MS培养基               6-苄基氨基嘌呤    0.19-0.21 mg/L

吲哚乙酸   0.19-0.21 mg/L               糖  24-26g/L    

琼脂        6.5-7.5g/L，

且其pH值=5.8；

第五步，春化和加倍

待单倍体苗长到3叶或3个分蘖时，低温春化20-25天，室温缓苗2天，然后冲洗掉根部的培养基，将麦苗浸入由500 -750 mg/L的秋水仙素+20g/L的二甲基亚砜+0.5g/L的吐温-20组成的染色体加倍溶液，使分蘖节处于溶液液面下2.5cm-3.5 cm，在23-25℃加光照条件下处理6-8小时进行染色体加倍；

第六步，移栽

处理后的麦苗清水冲洗浸泡1天，移栽到温室或田间草炭土中，遮阴保湿缓苗半月后正常管理；

第七步，收获

小麦成熟后，收获获得双单倍体种子。

2.根据权利要求1所述的一种小麦×玉米远缘杂交生产小麦双单倍体的方法，其特征在于：

所述小胚培养基的配方为：

 1/2MS基本培养基与 B5维生素、    2,4-二氯苯氧乙酸 0.1mg/L、

甘氨酸2.0mg/L                乳氨酸  600mg/L

糖  50g/L、                    琼脂 7.0g/ L，

且其pH值=5.8；

所述基础培养基的配方为：

1/2MS培养基，         糖  25g/L      琼脂 7.0g/L，

且其pH值=5.8；

所述大胚培养基配方为：

1/2MS培养基               6-苄基氨基嘌呤    0.20 mg/L

吲哚乙酸   0.20 mg/L               糖  25g/L    

琼脂        7.0g/L，

且其pH值=5.8。

3.根据权利要求1所述的一种小麦×玉米远缘杂交生产小麦双单倍体的方法，其特征在于：

在所述第五步春化和加倍步骤中：

待单倍体苗长到3叶或3个分蘖时，低温春化20-25天，室温缓苗2天，然后冲洗掉根部的培养基，将麦苗浸入由625mg/L的秋水仙素+20g/L的二甲基亚砜+0.5g/L的吐温-20组成的染色体加倍溶液，使分蘖节处于液面下3.0 cm，在24℃加光照条件下处理7小时进行染色体加倍；

在所述第六步移栽步骤中：

处理后的麦苗清水冲洗浸泡1天，移栽到温室或田间草炭土中，遮阴保湿缓苗半月后正常管理。