[发明专利]梭菌AUH-JLC140及其在去氧甲基安哥拉紫檀素生物合成中的应用

权利要求书

1.一种梭菌（Clostridium sp.）AUH-JLC140，保藏号为CGMCC No.5305。

2.根据权利要求１所述的梭菌AUH-JLC140在去氧甲基安哥拉紫檀素生物合成中的应用，其特征在于用于生物合成去氧甲基安哥拉紫檀素。

3.根据权利要求2所述的梭菌AUH-JLC140在去氧甲基安哥拉紫檀素生物合成中的应用，其特征在于在厌氧条件下能将底物黄豆苷原转化合成去氧甲基安哥拉紫檀素，其应用方法包括下述步骤：

（1）菌株AUH-JLC140的培养

将低温冷冻保存的梭菌AUH-JLC140融化并按15-20%接种量接种到盛有新鲜BHI液体培养基的试管中，在厌氧工作站内37oC下培养24小时；再以10%接种量将试管中的菌株AUH-JLC140重新转接到盛有新鲜BHI液体培养基中，继续在厌氧工作站内培养18-24小时作为种子液；

（2）底物黄豆苷原与菌株AUH-JLC140共培养及代谢产物的分离纯化

①底物黄豆苷原与菌株AUH-JLC140共培养

将菌株AUH-JLC140的种子液按10-15%接种量转接到BHI液体培养基中培养，根据黄豆苷原母液浓度为40-60毫摩尔/升及三角瓶中培养基体积，确定母液加入量，使得黄豆苷原在培养基中的浓度为0.6毫摩尔/升, 在厌氧工作站内培养3-4天，即可将底物黄豆苷原高效转化为去氧甲基安哥拉紫檀素；

②代谢产物的分离纯化

用等体积的乙酸乙酯将三角瓶内培养物萃取2次，萃取液过滤后蒸干，加入100%甲醇溶液，用制备柱在HPLC上分离制备代谢产物。