[发明专利]一种提取石斛总RNA的方法

权利要求书

1.一种提取石斛总RNA的方法，其特征在于所述的方法为：

(1)将采集的新鲜石斛茎置于液氮中研磨成粉末，转入经焦碳酸二乙酯处理过的离心管中，加入含水饱和酚的RNA提取液中，混匀后剧烈振荡5～10min，再加入氯仿，振荡，抽提5～10min，室温下5000rpm离心15min，得上清液A；所述RNA提取液由如下组分组成：pH9.0的50mM Tris-Cl，100mM NaCl，1％SDS；

(2)取步骤(1)获得的上清液A加入pH为4.8的KAc溶液，KAc溶液的浓度为5mol/L，充分混匀，4℃放置15～30min，4℃下12000g离心20min，得上清液B；所述Kac溶液体积用量为上清液A体积的1/3；

(3)取步骤(2)获得的上清液B，加入等体积氯仿，用力振荡，抽提5～10min，室温下5000rpm离心15min，取上清液，重复抽提3～5次，最终得上清液C；

(4)取步骤(3)获得的上清液C，加1/3体积8M的LiCl，混匀，于4℃放置16h～20h沉淀RNA，然后4℃下10000rpm离心20min，得沉淀D；

(5)取步骤(4)获得的沉淀D，用70％的乙醇洗涤后，吹干洗涤后的沉淀，用焦碳酸二乙酯处理重蒸馏水溶解吹干后的沉淀，获得所述石斛总RNA，在-80℃中保存备用。

2.如权利要求1所述的提取石斛总RNA的方法，其他在于步骤(1)所述含水饱和酚的体积用量是RNA提取液体积的30％。

3.如权利要求1所述的提取石斛总RNA的方法，其他在于步骤(3)所述等体积氯仿重复抽提3次。