[发明专利]一种适用于多糖多酚植物组织高质量RNA快速提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及从植物组织中的快速提取高质量的RNA，特别是从多糖多酚的植物组织包括植物的果实中提取高质量RNA的试剂及方法。

背景技术

富含多糖、多酚及次生代谢物的植物组织高质量RNA的提取较为困难，目前一般采用冷酚法、热酚法以及LiCl沉淀法。冷酚法步骤较多，整个过程需要保持低温状态；而LiCl沉淀法需沉淀过夜，耗时长、效率低。因此，找到一种适用于富含多糖、多酚及次生代谢物的植物组织高质量RNA快速提取的方法可以为开展此类植物分子生物学的研究奠定良好的基础。一些商品化的试剂盒大都是采用TRIZOL法，无法从富含多糖、多酚及次生代谢物的植物组织中获得高质量的RNA。有部分针对富含多糖、多酚植物组织RNA提取的专门试剂，但适用性不广，提取的RNA有基因组DNA污染，效果不甚理想。本发明的目的是克服现有从富含多糖、多酚及次生代谢物的植物组织中提取RNA方法的不足，提供一种新的提取方法高效、快速地从富含多糖、多酚及次生代谢物的植物组织中分离高质量RNA的方法。

使用本发明提取的植物组织RNA质量高，适用于下游与基因表达有关的分子生物学实验，但在提取过程中，5S RNA丢失，所以本发明不适用于提取植物组织中的small RNA(20～25nt)。

发明内容

本发明的目的是提供主要试剂及操作方法从富含多糖、多酚及次生代谢物的植物组织中快速提取高质量RNA用于下游分子生物学实验，提高实验成功率和实验效率。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：提供一种适用于多糖多酚植物组织高质量RNA快速提取方法，其特征在于使用裂解液、沉淀液、重悬液按裂解-抽提-沉淀-重悬-抽提-沉淀流程提取RNA；具体步骤如下：

(1)取多糖多酚植物组织于液氮中粉碎；

(2)在2mL离心管加入1.2mL 65℃预热的裂解液，加入液氮粉碎后的植物组织，振荡混匀；

(3)加入600μL的氯仿和异戊醇的混合液，氯仿和异戊醇的体积比为24∶1，振荡混匀，4℃以下，8000r/min，离心15min；

(4)取上清，加入400μL沉淀液，混匀，-20℃沉淀0.5～2小时后，4℃以下，12000r/min，离心15min；

(5)弃上清，以500μL重悬液沉淀，加入500μL冰冷的水饱和酚(PH＜5.0)，振荡混匀后冰上放置10min，4℃以下，12000r/min，离心15min；

(6)取上清，加入500μL氯仿与异戊醇的混合液，振荡混匀后冰浴10min，4℃以下，12000r/min，离心15min；

(7)取上清，加入1mL无水乙醇，冰上沉淀30min，4℃以下12000r/min，离心15min；

(8)沉淀物以75％乙醇洗涤2次，风干，RNase free H₂O溶解。

较佳地，所述的裂解液由以下成分配制：50mM Tris-HCl(PH 8.0)(RNasefree H₂O配制)；10mM EDTA(PH 8.0)；1M NaCl；2％(W/V)CTAB；100mMLiCl；2％PVP40(可以使用前加入)；2％β-巯基乙醇(使用前加入)。其中EDTA，NaCl，CTAB，LiCl均需用0.1％DEPC处理过夜。

较佳地，所述的沉淀液由以下成分配制：8M LiCl，0.1％DEPC处理过夜后灭菌。

较佳地，所述的重悬液由以下成分配制：0.2M NaCl，0.1％DEPC处理过夜后灭菌。

本发明的有益效果：1、快速；2、高效；3、RNA质量高；4、无DNA污染

本发明的优点：可以从富含多糖、多酚及次生代谢物的植物组织中快速提取高质量的RNA。

附图说明

图1：使用本发明试剂及方法从富含多糖、多酚植物组织中提取的RNA；

图2：香蕉叶片及根的RNA；其中1、2为香蕉叶片RNA图；3、4为香蕉根RNA图；

图3：香蕉、龙眼、番木瓜果肉RNA；其中5、6为番木瓜果肉RNA图，7、8为香蕉果肉RNA图，9、10为龙眼果肉RNA图；

具体实施方式

下面结合优选实施例对本发明作进一步说明，但本发明决不限于下述实施例。

实施例1应用本发明试剂及方法提取香蕉叶片以及根部的RNA

(1)从香蕉幼苗上取新鲜叶片及根各200mg于液氮中粉碎；

(2)在2mL离心管加入1.2mL 65℃预热的裂解液，加入液氮粉碎后的植物组织，振荡混匀；