[发明专利]鸡绿壳蛋基因的克隆及其应用

权利要求书

1.一种鉴定或辅助鉴定待测鸡是否为绿壳蛋鸡的方法，为检测待测鸡的基因组DNA，若基因组DNA中含有目的DNA分子，则所述待测鸡为或候选为绿壳蛋鸡；若基因组DNA中不含有目的DNA分子，则所述待测鸡不为或候选不为绿壳蛋鸡；

所述目的DNA分子为如下1)-3)中的任意一种：

1)序列表中的序列1所示的DNA分子；

2)在严格条件下与1)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；

3)与1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且具有相同功能的DNA分子。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述目的DNA分子在鸡基因组DNA的位置为SLCO1B3基因的上游，所述目的DNA分子在所述鸡基因组DNA的位置具体为在鸡基因组的第一号染色体的第67324641-67324642位间；

所述检测待测鸡的基因组DNA的方法为测序、PCR或分子杂交；

所述待测鸡的基因组DNA来源于离体的鸡组织器官或血液。

3.一种鉴定或辅助鉴定待测是否为绿壳蛋鸡的方法，用引物序列4和引物序列5扩增待测鸡的基因组DNA，若PCR产物长度含有6kb片段，则所述待测鸡为或候选为绿壳蛋鸡；若PCR产物中不含有6kb的片段，则所述待测鸡不为或候选不为绿壳蛋鸡；

所述6kb的片段的核苷酸序列为序列表中的序列2；

所述检测待测鸡的基因组DNA的方法为测序、PCR或分子杂交；

所述待测鸡的基因组DNA具体来源于离体的鸡组织器官或血液。

4.一种鉴定或辅助鉴定待测鸡的基因型方法，为检测待测鸡的基因组DNA，若所述基因组DNA中含有6kb片段或所述目的DNA分子，则所述待测鸡的基因型为或候选为O/O纯合型或O/o杂合型；若基因组DNA中不含有6kb的片段或所述目的DNA分子，则所述待测鸡不为或候选不为O/O纯合型或O/o杂合型；

所述6kb的片段的核苷酸序列为序列表中的序列2；

所述检测待测鸡的基因组DNA的方法为测序、PCR或分子杂交；

所述待测鸡的基因组DNA具体来源于离体的鸡组织器官或血液。

5.权利要求4所述的方法在鉴定待测鸡是否为绿壳蛋鸡中的应用；所述应用为若所述待测鸡的基因型为O/O纯合型或O/o杂合型任意一种，则所述待测鸡为绿壳蛋鸡；若所述待测鸡的基因型不为O/O纯合型或O/o杂合型中的任意一种，则所述待测鸡不为绿壳蛋鸡。

6.一种DNA分子，为如下1)-4)中任一所述的DNA分子：

1)序列表中的序列1所示的DNA分子；

2)序列表中的序列2所示的DNA分子；

3)在严格条件下可与1)或2)限定的DNA序列杂交的DNA分子；

4)与1)或2)限定的DNA序列具有70％以上的同源性的DNA分子。

7.扩增权利要求6所述DNA分子的引物对，所述引物对具体由序列表中的序列4所示的一条引物和序列表中的序列5所示的另一条引物组成。

8.含有权利要求7所述的引物对的PCR试剂或试剂盒；

所述PCR试剂具体由权利要求7所述的引物对、dNTP、DNA聚合酶和PCR缓冲液组成；所述的引物对中的每条引物在所述PCR试剂中的浓度均具体为0.4pmol/μL。

9.权利要求6所述的DNA分子、权利要求7所述的引物对、权利要求8所述的PCR试剂或试剂盒在鉴定或辅助鉴定待测鸡是否为绿壳蛋鸡中的应用；

或权利要求6所述的DNA分子、权利要求7所述的引物对、权利要求8所述的PCR试剂或试剂盒在鉴定或辅助鉴定待测鸡的基因型中的应用；所述待测鸡基因型具体为O/O纯合型或O/o杂合型；所述待测鸡具体为绿壳蛋鸡。

10.一种鉴定或辅助鉴定待测鸡基因型的方法，为用权利要求7所述的引物对或权利要求8所述PCR试剂或试剂盒中的引物对对待测鸡进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，检测PCR扩增产物，若仅得到6kb大小的PCR扩增产物，则待测鸡基因型为或候选为O/O纯合型；若得到6kb和1.8kb的PCR扩增产物，则待测鸡基因型为或候选为O/o杂合型；

所述6Kb的PCR扩增产物的核苷酸序列为序列表中的序列2；

所述1.8Kb的PCR扩增产物的核苷酸序列为序列表中的序列3；

所述PCR扩增的模板具体为待测鸡的基因组DNA；

所述PCR扩增的退火温度具体为58℃；

所述待测鸡具体为绿壳蛋鸡；

所述待测鸡的基因组DNA具体来源于离体的鸡组织器官或血液。