[发明专利]青钱柳愈伤组织及愈伤组织颗粒的悬浮培养方法无效
| 申请号： | 201110372625.7 | 申请日： | 2011-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN102487819A | 公开（公告）日： | 2012-06-13 |
| 发明（设计）人： | 孟凡国;张永江;莫颖芸;许衡 | 申请（专利权）人： | 嘉兴浙华农业技术开发有限公司 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 杭州九洲专利事务所有限公司 33101 | 代理人： | 翁霁明 |
| 地址： | 314026 浙江省嘉兴市南湖*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 青钱柳愈伤 组织 颗粒 悬浮 培养 方法 | ||
1.一种青钱柳愈伤组织及愈伤组织颗粒的悬浮培养方法，其特征在于它主要包括如下步骤：
1）植物体的选择及无菌处理：选择3～7月及9～11月间的健康的青钱柳植株，取当年生嫩枝及嫩叶进行清洗，洗涤剂浸泡5-20min，清水冲洗0.5～2h；无菌条件下将清洗后70%～80%酒精消毒5-30s，再利用0.1%的升汞灭菌5～20min或2%-12%次氯酸钠灭菌5～20min；
2）愈伤组织诱导培养：将灭菌的愈伤组织接种到诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养；基本培养基为MS培养基，在培养基中加入0～5mg/mlNAA，0～5mg/ml的6-BA,20～30g/L的蔗糖，4-7g琼酯，pH值为5.0～7.0，培养温度：17～28℃；培养时间：1～25天；光照时间：0～24h；光照强度：0～10000Lux；
3）愈伤组织颗粒悬浮培养：选取生长健康，代谢旺盛，结构疏松的愈伤组织，接种至装有200ml液体培养基的锥形瓶中震荡培养；培养基为：MS基本培养基，加入0～5mg/mlNAA，0～5mg/ml的6-BA,20～30g/L的蔗糖，pH值为5.0～7.0，培养温度：17～28℃；培养时间：1～20天；光照时间：0～24h；光照强度：0～10000Lux，转速：50～200r/min；
4）愈伤组织扩大培养：待愈伤组织处于对数生长期时，选取悬浮培养体系内均匀分散生长旺盛的愈伤组织颗粒接种至5L发酵罐中，剔除瓶底老化褐变的愈伤组织团块，用发酵罐进行扩大培养；培养基为：MS基本培养基，加入0～5mg/mlNAA，0～5mg/ml的6-BA,20～30g/L的蔗糖，pH值为5.0～7.0，培养温度：17～28℃；培养时间：1～20天；光照时间：0～24h；光照强度：0～10000Lux，转速：50～200r/min。
2.根据权利要求1所述的青钱柳愈伤组织及愈伤组织颗粒的悬浮培养方法，其特征在于在第1）步骤中，将灭菌后的外植体切成0.3～0.5cm2的组织块并用于第2）步骤中；而在第2）步骤中，培养期间根据愈伤组织生长情况，进行转瓶扩繁；在第4）步骤中，至少应根据pH变化进行补料及转速调整。
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