[发明专利]鉴定猪流感病毒的引物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种鉴定猪流感病毒的引物及其应用。

背景技术

猪流感(Swine Influenza，SI)是由A型流感病毒引起的一种急性传染性猪的呼吸道疾病，其特征为突发、咳嗽、发热、呼吸困难、衰竭，还可导致怀孕母流产等猪繁殖障碍。虽然SI的死亡率不高，但其影响猪的发育，延缓猪的生长及出栏时间；SI还是一种免疫抑制性疾病，可以破坏猪的免疫系统而引起免疫抑制，导致其他疫病并发或继发感染，加剧病情，给养猪业造成重大的经济损失。自1918年临床上发现经典型H1N1亚型SI以来，不断有新亚型、基因型毒株的出现，对养猪业造成的经济损失不可估量；又由于“猪”在流感病毒传播中的混合器的特殊角色，在人类流感的流行中SI发挥了重要的作用，严重危害人类的健康。目前我国在猪群中发现的猪流感病毒谱系及亚型有：经典H1N1亚型猪流感病毒、北美三元重排H1亚型猪流感病毒、欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒、2009年甲型H1N1猪流感病毒、类人H3亚型猪流感病毒、H9亚型猪流感病毒、也见有在猪群中发现了H5亚型流感病毒的报道。近年来猪流感病毒在我猪群中的发现和流行，严重危害养猪业的健康发展，并威胁着人类健康。

目前鉴定猪流感病毒的方法主要有以下几种方法：传统的方法是将病料接种鸡胚或MDCK细胞，盲传后通过HA和HI试验进行鉴定；1991年S.Takimoto等建立了免疫荧光和ELISA检测流感病毒NP蛋白的方法；1990年A.Bressoud等建立了检测H1亚型流感病毒的RT-PCR诊断方法；1994年E.Schorr等建立了检测H1亚型猪流感病毒的RT-PCR方法；2002年Y.K.Choi等建立了检测H1N1和H1N2及H1N1和H3N2亚型猪流感病毒的双重RT-PCR检测方法；2008年C.S.Lee等根据韩国流行的猪流感病毒建立了诊断H1N1、H1N2、H3N2亚型猪流感病毒的多重RT-PCR检测方法。但目前尚没有针对猪流感病毒的不同谱系、不同亚型而建立的诊断方法。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测猪流感病毒的引物。

本发明提供的引物，由引物组A-引物组E组成：

所述引物组A由引物1和引物2组成；

所述引物组B由引物3和引物4组成，

所述引物组C由引物5和引物6组成，

所述引物组D由引物7和引物8组成，

所述引物组E由引物9和引物10组成，

所述引物1-引物10的核苷酸序列分别依次为序列表中序列1-序列10。

所述引物组A-引物组E均为独立包装。

在上述引物中，所述猪流感病毒为如下1)或2)：

1)类人H3亚型猪流感病毒、欧洲类禽H1亚型猪流感病毒、经典H1亚型猪流感病毒、H9亚型猪流感病毒和H5亚型流感病毒；

2)类人H3亚型猪流感病毒、欧洲类禽H1亚型猪流感病毒、经典H1亚型猪流感病毒、H9亚型猪流感病毒和H5亚型流感病毒的至少一种。

本发明的另一个目的是提供一种检测猪流感病毒的PCR试剂。

本发明提供的PCR试剂，由试剂A-试剂E组成；

所述试剂A由所述引物组A和PCR缓冲液组成；

所述试剂B由所述引物组B和PCR缓冲液组成；

所述试剂C由所述引物组C和PCR缓冲液组成；

所述试剂D由所述引物组D和PCR缓冲液组成；

所述试剂E由所述引物组E和PCR缓冲液组成。

在上述PCR试剂中，所述试剂A-试剂E均为独立包装；

在上述PCR试剂中，上述引物1-引物10在其对应的试剂中的终浓度均为0.4-4pmol/μl；在本发明的实施例中终浓度均为0.4pmol/μl；

在上述PCR试剂中，所述PCR缓冲液均购自北京全式金生物技术有限公司。

在上述PCR试剂中，所述猪流感病毒为如下1)或2)：

1)类人H3亚型猪流感病毒、欧洲类禽H1亚型猪流感病毒、经典H1亚型猪流感病毒、H9亚型猪流感病毒和H5亚型流感病毒；

2)类人H3亚型猪流感病毒、欧洲类禽H1亚型猪流感病毒、经典H1亚型猪流感病毒、H9亚型猪流感病毒和H5亚型流感病毒中的至少一种。

本发明的第三个目的是提供一种检测猪流感病毒的试剂盒。

本发明提供的试剂盒，由试剂盒A-试剂盒E组成；

所述试剂盒A为含有所述试剂中的试剂A；