[发明专利]根特异启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体及构建方法

权利要求书

1.一种根特异启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体，其特征在于：所述的根特异启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体的出发载体为PGreen0229质粒载体，所述的根特异启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体的启动子是水稻根特异性启动子基因EXP18-D，所述的水稻根特异性启动子基因EXP18-D的下游包含有水通道蛋白基因ZMPIP2a。

2.根据权利要求1所述的根特异启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体，其特征在于：所述的水稻根特异性启动子基因EXP18-D的序列为序列表中的SEQ ID No：4。

3.根据权利要求1或2所述的根特异启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体，其特征在于：所述的水通道蛋白基因ZMPIP2a的序列为序列表中的SEQ ID No：5。

4.一种根特异启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体的构建方法，其特征在于：所述的根特异启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体的出发载体为PGreen0229质粒载体，所述的根特异启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体的启动子是水稻根特异性启动子基因EXP18-D，所述的水稻根特异性启动子基因EXP18-D的下游包含有水通道蛋白基因ZMPIP2a；

所述的根特异启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体的构建方法包括以下步骤：

Ⅰ、UBQI-Nos- 35Sbar -PGreen0229质粒载体构建：

A、将基因35Sbar连接到PGreen0229质粒载体，得到35Sbar- PGreen0229质粒载体；

B、将基因Nos连接到所述的35Sbar -PGreen0229质粒载体，得到Nos- 35Sbar -PGreen0229质粒载体；

C、将基因UBQI连接到所述的Nos-35Sbar -PGreen0229质粒载体，得到UBQI-Nos- 35Sbar -PGreen0229质粒载体；

Ⅱ、EXP18-D- ZMPIP2a-PGM-0229质粒载体构建；

A、将所述的UBQI-Nos- 35Sbar -PGreen0229质粒载体进行酶切反应，切除基因UBQI，得到Nos- 35Sbar -PGreen0229质粒载体B：

B、 克隆水稻根特异性启动子基因EXP18-D，并连接到PMD18-T simple质粒载体，得到EXP18-D-T质粒载体；

C、用所述的EXP18-D-T质粒载体和Nos- 35Sbar -PGreen0229质粒载体B构建EXP18-D-PGM-0229质粒载体；

D、克隆水通道蛋白基因ZMPIP2a，并连接到PMD18-T simple质粒载体，得到ZMPIP2a-T质粒载体；

E、用所述的ZMPIP2a-T质粒载体和EXP18-D-PGM-0229质粒载体构建EXP18-D- ZMPIP2a-PGM-0229质粒载体，即为所述的启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体。

5.据权利要求4所述的根特异启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体的构建方法，其特征在于：所述的基因35Sbar的序列包含在序列表中的SEQ ID No：1中。

6.据权利要求4或5所述的根特异启动子驱动水通道蛋白基因 ZMPIP2a表达载体的构建方法，其特征在于：所述的基因Nos的序列包含在序列表中的SEQ ID No：2中。