[发明专利]一种制备β-葡萄糖苷酶的方法

说明书

 

 技术领域

本发明涉及一种制备β-葡萄糖苷酶的方法。

背景技术

β-葡萄糖苷酶是广泛存在于动植以及微生物物中的一种功能酶，在植物中，其与植物的颜色、气味和生物学功能密切相关。目前，β-葡萄糖苷酶可用于食品、化工、医药中的色素、香料、气味成份、配糖体活性物质、功能糖等方面的提取和改性。但目前，β-葡萄糖苷酶来源很少，目前植物来源的β-葡萄糖苷酶主要是来自于苦杏仁。鉴于苦杏仁的药用特性及有限产量，目前β-葡萄糖苷酶价格极高，尚无法在生产中大量采用。本发明人在研究中发现橡胶籽中存在大量、高活性的β-葡萄糖苷酶，并研究出一整套生产的方法，以期拓展β-葡萄糖苷酶来源，并推动β-葡萄糖苷酶在食品、化工、医药行业中的应用。

本发明利用橡胶种植的废弃物橡胶籽，通过一定的工艺手段，提取和生产β-葡萄糖苷酶产品，在原料来源和制备方法上有创新。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备β-葡萄糖苷酶的方法。

本发明为解决其技术问题所采取的技术方案是：

    其特征在于：包括以下步骤：

1) 以干净干燥橡胶籽为原料，种仁含水率在5－15%；

2) 去壳，种仁粉碎，过10－50目筛，作为原料备用；

3) 脱脂：取0.1－5000kg的粉碎橡胶籽原料，加入1－5倍重量丙酮、正已烷、乙酸乙酯、石油醚、乙醚中的一种或几种于5－40℃浸泡10-600min；分离固体和液体，取固体；重复2－3次，所得固体低温晾干或抽真空除溶剂，备用；

4) 脱脂橡胶籽粉中加入1－10倍提取液，搅拌混匀，保持温度5－40℃，提取10－600min；分离固体和液体，取液体；重复1－3次，合并提取液，过滤除颗粒；

5) 真空冷冻干燥或快速喷雾干燥得到粉状、颗粒状橡胶籽β-葡萄糖苷酶产品。

    所述的提取液是pH4.5-8.0，浓度为0－0.5mol/L的磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、柠檬酸缓冲液中的一种或几种。

本发明具有如下优点：

1． 本发明舍弃传统的苦杏仁原料，转而采用产量大、价格低的橡胶籽为原料提取β-葡萄糖苷酶。

2． 本发明所制备的β-葡萄糖苷酶产品活力高，产品酶活力可达1000－2000u/g。

3． 本发明采用的工艺简单，生产周期短，成本低，但产品能满足一般的工业应用需要。

具体实施方式

以下是本发明的实施例，但不限制本发明：

例1：取1kg橡胶籽粉，加入丙酮2L，浸泡10min脱脂，离心去上清。取脱脂橡胶籽粉，加入pH5.0磷酸缓冲提取液1L，浸泡30min，同时搅拌，离心去沉淀。将所得上清液冷冻干燥即得以橡胶籽β-葡萄糖苷酶产品。

例2：取10kg橡胶籽粉，加入丙酮30L，浸泡20min脱脂，离心去上清。取脱脂橡胶籽粉，加入pH6.0磷酸缓冲提取液10L，浸泡30min，同时搅拌，离心去沉淀。将所得上清液冷冻干燥即得以橡胶籽β-葡萄糖苷酶产品。

例3：取100kg橡胶籽粉，加入丙酮300L，浸泡20min脱脂，离心去上清。重复2次脱脂过程。取脱脂橡胶籽粉，加入pH7.0磷酸缓冲提取液100L，浸泡50min，同时搅拌，离心去沉淀。将所得上清液冷冻干燥即得以橡胶籽β-葡萄糖苷酶产品。