[发明专利]培养肝脏干细胞的方法无效
| 申请号： | 201110378651.0 | 申请日： | 2011-11-24 |
| 公开（公告）号： | CN102399744A | 公开（公告）日： | 2012-04-04 |
| 发明（设计）人： | 毕薇薇 | 申请（专利权）人： | 吉林省拓华生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735 |
| 代理公司： | 北京北新智诚知识产权代理有限公司 11100 | 代理人： | 王淳 |
| 地址： | 136000 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 培养 肝脏 干细胞 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种培养肝脏干细胞的方法，其特征在于，步骤如下：
a.在无菌条件下，取肝脏组织，用含有双抗的PBS冲洗3遍；
b.将肝脏组织剪碎，用0.25％g/mL的胰蛋白酶溶液，消化30分钟；
c.用完全培养基中和消化液；
d.将经过步骤b消化和步骤c中和后的肝脏组织在消化液和中和液的混合液体中吹打混匀，以500转/分钟离心5分钟，取上层清液，之后再以1500转/分钟离心5分钟；
e.弃去上层清液，将沉淀用完全培养基悬起，接种于培养瓶中，在37℃下、5％CO2的环境中培养；
f.培养4天后，洗去未贴壁的细胞，用完全培养基进行换液；
g.每隔4天用完全培养基换一次液，待细胞生长扩增达到占培养瓶底面积80％以上，1∶2传代。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的完全培养基为含10wt％胎牛血清的α-MEM培养基。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤a中所述的双抗，为在PBS中的终浓度为1％g/mL的青霉素和1％g/mL的链霉素。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤g中，在传代之前，将细胞用胰蛋白酶-EDTA混合液消化。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的胰蛋白酶-EDTA的混合液是由0.25％g/mL的胰蛋白酶和0.02wt％EDTA以1∶1的体积比混合得到的混合液。
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