[发明专利]硫解酶及其编码基因和它们的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种硫解酶，还涉及硫解酶的编码基因，以及含有硫解酶基因的重组载体和细胞，以及硫解酶及其编码基因含有该基因的重组载体及细胞在培育具有耐碱性转基因生物中的应用。

背景技术

硫解酶，也称作乙酰辅酶A酰基转移酶。在辅酶A存在下，将β酮酰基辅酶A硫解为乙酰辅酶A和酰基辅酶A，后者较原先的酰基辅酶A少两个碳原子。在真核细胞中，特别是哺乳动物细胞中，硫解酶的底物特异性及代谢功能因在胞内的不同位置而有所差别。例如，在过氧化物酶体和线粒体中，它有助于脂肪酸β-氧化，在线粒体中，它参与酮体代谢，而在过氧化物酶体和细胞质中，它参与甲羟戊酸途径的早期步骤。除了生化分析，酿酒酵母中的遗传方面的研究也证明硫解酶在多种途径中是至关重要的，如脂肪酸，类固醇的关键酶途径和聚酮合成。

发明内容

本发明的发明人基于对硫解酶的分子生物学研究，意外地发现从嗜碱单胞菌(Alkalimonas amylolytica N10，CGMCC NO.0463)中得到了一种硫解酶及其编码基因，另一方面还提供了含有硫解酶基因的重组载体和细胞，以及硫解酶及其编码基因含有该基因的重组载体及细胞在培育具有耐碱性转基因生物中的应用。

本发明提供了一种硫解酶，其中，该硫解酶具有SEQ ID No：2所示的氨基酸序列，或者该硫解酶具有将SEQ ID No：2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加后仍具有硫解酶活性的氨基酸序列。

本发明提供了一种硫解酶基因，其中，该基因具有SEQ ID No：1所示的核苷酸序列，或者该基因具有编码SEQ ID No：2所示的氨基酸序列的核苷酸序列。

另外，本发明提供了一种重组载体，其中，该重组载体含有本发明提供的硫解酶基因。

本发明提供了一种转基因细胞，其中，该转基因细胞含有本发明提供的硫解酶基因。

本发明还提供了得到的硫解酶及其编码基因、含有该基因的重组载体及转基因细胞在培育具有耐碱性转基因生物中的应用。

硫解酶在耐盐碱植物培育等方面具有重要的应用潜力。通过克隆得到硫解酶基因，并通过转基因的操作将微生物来源的硫解酶导入到植物细胞中，获得耐盐碱性提高的转基因植株成为可能。

附图说明

图1显示了重组载体pUC18-Aan10-atoB导入的大肠杆菌K12(pUC18-Aan10-atoB)的耐碱性的测定结果，其中，将重组载体pUC18-Aan10-atoB导入的大肠杆菌K12(pUC18-Aan10-atoB)分别接种到pH为8.0、8.5、9.0和9.5(含有50mM的CAPS、HEPES和TRICINE，5N NaOH调节)的LB液体培养基中(100μg/ml氨苄青霉素)，培养12小时后测定OD₆₀₀，以导入pUC18空载体的大肠杆菌K12为对照(每组三个平行)。

图2显示了硫解酶缺失的大肠杆菌K12(ΔatoB)以及导入重组载体pUC18-Aan10-atoB的K12(ΔatoB)(pUC18-Aan10-atoB)耐碱性的测定结果，其中，将导入重组载体pUC18-Aan10-atoB的K12(ΔatoB)(pUC18-Aan10-atoB)和硫解酶缺失的大肠杆菌K12(ΔatoB)分别接种到pH为8.0、8.5、9.0和9.5(含有50mM的CAPS、HEPES和TRICINE，5N NaOH调节)的LB液体培养基中，培养12小时后测定OD₆₀₀，以大肠杆菌K12为对照(每组三个平行)。

具体实施方式

以下本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

本发明提供了一种硫解酶，其中，该硫解酶具有SEQ ID No：2所示的氨基酸序列，或者该硫解酶具有将SEQ ID No：2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加后仍具有硫解酶活性的氨基酸序列。优选地，所述硫解酶具有SEQ ID No：2所示的氨基酸序列。

相应地，本发明提供了一种硫解酶基因，其中，该基因具有SEQ ID No：1所示的核苷酸序列，或者该基因具有编码SEQ ID No：2所示的氨基酸序列的核苷酸序列。优选地，所述基因具有SEQ ID No：1所示的核苷酸序列。