[发明专利]猪体内雌二醇残留的快速检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测雌二醇的试剂盒。

本发明还涉及使用上述试剂盒检测雌二醇残留的方法。

背景技术

雌激素类药物是动物饲养中应用最为广泛、效果显著的一类生长促进剂，由于具有促进动物体内营养物质沉积和改善生产性能的作用，用来提高饲料转化率，促进动物生长，可以很快为畜牧养殖业带来显著的经济效应，曾广泛应用于畜牧养殖过程中。而雌二醇是养殖过程中最常用的一种雌激素，滥用雌二醇会造成动物体内不同程度的残留，人体一旦食用有雌二醇残留的动物性食品后，就可通过食物链扰乱人体内激素平衡，使女性儿童提前发育，男性儿童呈女性化，使男性生殖系统病变及女性乳腺癌发生率上升。自上世纪90年代开始，欧盟对雌二醇药物残留进行了严格的限制。我国农业部176公告已经明确规定禁止在动物饲养过程中使用雌二醇。

目前，国内外有关尿液中雌二醇物检测方法的研究较多，主要包括高效液相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱法。但是，液相色谱法和液相色谱-质谱法检测时需要对样品进行酶解，气相色谱-质谱法检测时需要对样品进行衍生化，前处理繁琐，耗时较长，且用较多的试剂，从而对环境造成污染。目前已知雌二醇在动物体内通过代谢转化为葡萄糖醛酸类的代谢产物，这些雌二醇及其代谢产物最终可通过尿液排出体外。而检测雌二醇的代谢物就可避免这些繁琐的前处理操作，而且代谢物的响应值比雌二醇的响应值要高。

发明内容

所以本发明研制了一种用于检测尿液中雌二醇代谢产物的试剂盒，并采用液相色谱串联四级杆质谱分析。故本发明通过对猪尿中的雌二醇-17-葡萄糖醛酸进行检测，避免了雌二醇的酶解和衍生的复杂过程，从而可以快速判断生猪是否喂食了违禁药物雌二醇，在养殖和屠宰方面做到很好的监控。

本发明的目的在于主要为养殖场和屠宰场提供一种灵敏度高，可以快速且准确地测定雌二醇的代谢产物雌二醇-17-葡萄糖醛酸，进而可以判断生猪是否喂食违禁药物雌二醇的试剂盒和方法。

一种检测雌二醇-17-葡萄糖醛酸试剂盒，包括标准品溶液、甲醇、氨化甲醇和C18SPE柱。

所述的检测雌二醇-17-葡萄糖醛酸试剂盒，其特征在于：标准品溶液储存在安瓿瓶中，体积为1-5ml，浓度为0.1mg/L-5mg/L，溶剂为甲醇或乙腈。

所述的检测雌二醇-17-葡萄糖醛酸试剂盒，其特征在于：甲醇溶液储存在安瓿瓶中，体积为5-20ml，色谱纯。

所述的检测雌二醇-17-葡萄糖醛酸试剂盒，其特征在于：氨化甲醇储存在安瓿瓶中，体积为5-20ml，氨化甲醇的比例为2％-25％。

所述的检测雌二醇-17-葡萄糖醛酸试剂盒，其特征在于：C18SPE柱柱内填料为C18，柱容量为3cc-6cc。

所述的试剂盒检测尿液的方法，包括如下步骤：

1)分别用3-10ml的甲醇和水活化C18SPE柱；

2)在活化好的C18SPE柱中加入1-3ml的尿液样品；

3)用4-8ml的水淋洗C18SPE柱；

4)用4-8ml的氨化甲醇对C18SPE柱进行洗脱；

5)洗脱液浓缩定容后过滤膜，上机检测。

所述的方法，其中步骤2中的待测样品为尿液样品。

所述的方法，其中步骤5是采用液相色谱串联四级杆质谱进行检测。

本发明具有以下优点：

a)灵敏度高；

b)测定速度快，单人次测定十个样品的时间约为20分钟；

c)准确度，稳定性和可靠性高，雌二醇代谢产物的响应值比原型药物的响应值高，更为其准确度提供了依据；

d)实验过程中试剂应用少，因此对环境的污染小。

附图说明

图1为加标尿液中雌二醇-17-葡萄糖醛酸的提取质谱图。

具体实施方式

试剂盒的盒体是指放置标准品溶液安瓿瓶、甲醇安瓿瓶、氨化甲醇安瓿瓶和C18SPE柱的包装物，该包装物通常是指可以防摔、防压的塑料盒，也包括内部具有隔热保温的泡沫塑料等材料，试剂盒存放时需要放置在冰箱的冷藏室，在运输过程中可放置冰块，但运输时间不能超过3天。一个典型的盒体为长20cm，宽15cm，高8cm的塑料盒，外加里边的保温塑料泡沫。

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。

实施例1