[发明专利]一种金黄色葡萄球菌的噬菌体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种噬菌体菌株及其应用，尤其是涉及一种能够抑制金黄色葡萄球菌的噬菌体。 

背景技术

金黄色葡萄球菌是食品中容易污染的一种革兰氏阳性病原菌，尤其是即食食品、冷鲜食品中，它也是医院中极易污染的病原菌。目前，在食品、饲料、医疗等领域中使用的抑制金黄色葡萄球菌的抗菌试剂主要有抗生素和化学防腐剂两类，但由于抗生素的过度使用，已有越来越多的金黄色葡萄球菌对抗生素产生了耐药性，甚至出现了多重耐药性菌株以及万古霉素抗性菌株，且抗生素残留后不易被快速降解。化学防腐剂则难以被人体分解，积累到一定量后可能具有潜在的毒副作用，因此存在安全性隐患。于是需要寻找可替代的、安全的抑菌试剂。 

目前已被发现的可被降解的抑菌试剂主要有溶菌酶、抗菌肽、乳铁蛋白、中草药提取物、特异性噬菌体等。溶菌酶虽然对部分细菌有良好的杀灭效果，但对多数金黄色葡萄菌菌株的抑制效果却很低。噬菌体近年来被认定为安全的抗菌性试剂，其杀菌效果优良、特异性高，允许在食品、医药、饲料等体系中添加使用。噬菌体可以吸附在金黄色葡萄球菌细胞壁表面的特定受体上，进入细胞内部后可以大量增殖，并通过释放出裂解酶而使噬菌体的子代颗粒从宿主中释放出来。而在这个过程中作为噬菌体的宿主菌则被杀死，从而起到控制病原菌金黄色葡萄球菌的目的。噬菌体是一种安全的、特异性高、抑菌效果特别好的抑菌剂。 

发明内容

      针对现有技术存在的上述问题，本申请人提供了一种金黄色葡萄球菌的噬菌体及其应用。本发明可以有效控制食品体系中的金黄色葡萄球菌污染，相对于抗生素和化学防腐剂而言，具有特异性高、无残留和安全的特点。 

      本发明的技术方案如下： 

一种金黄色葡萄球菌的噬菌体，保藏号为：CCTCC M 2011409，该噬菌体对金黄色葡萄球菌具有有效的裂解作用。该噬菌体保存条件为：噬菌体培养液过滤除菌后于4℃下可以保存2个月以上，于-70℃下保存于甘油管中可以保存2年以上；所述噬菌体培养液储液浓度为10¹¹ pfu/mL。

金黄色葡萄球菌的噬菌体的应用：将噬菌体培养液直接喷涂于固体食品的表面，或混合于含菌食品中，用于抑制食品中的金黄色葡萄球菌。噬菌体在含菌料中的添加量为0.0001~100 pfu/cfu。 

本发明有益的技术效果在于： 

申请人从食品加工厂的污水中通过大量筛选，分离到一株能特异性抑制金黄色葡萄球菌的噬菌体JS01，并对其裂解性能和对食品体系中金黄色葡萄球菌的控制作用进行了大量的研究工作，在此基础上提供了一种利用此噬菌体快速、有效抑制金黄色葡萄球菌的方法。

本抑菌剂仅包含专一性金黄色葡萄球菌噬菌体JS01。噬菌体随食品摄入人体后，可以被消化道内的酶类降解，并吸收、再利用，不会对人体产生任何毒副作用。 

当噬菌体以0.0002~2 pfu/cfu的添加量添加到金黄色葡萄球菌溶液中，可使金黄色葡萄球菌的数量降低4.8~7.7个数量级，对其它细菌则没有影响；当以MOI（MOI，即噬菌体与金黄色葡萄球菌的含量比pfu/cfu）为1的添加量添加到染菌食品中，在1天内可将金黄色葡萄球菌的数量降低4.5~6.0个数量级，抑菌效果优异。 

附图说明

图1为噬菌体JS01对金黄色葡萄球菌ATCC25923的抑制进程； 

图2为不同添加量的噬菌体JS01对金黄色葡萄球菌ATCC25923的抑制效果；

图3为噬菌体JS01对牛奶中病原菌的控制效果；

图4为噬菌体JS01对热狗中病原菌的控制效果。

具体实施方式

本噬菌体JS01保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2011.11.22，保藏编号：CCTCC NO：M 2011409，分类学命名：金黄色葡萄球菌噬菌体JS01 (Staphylococcus phage, dsDNA virus JS01)。 

实施例1：噬菌体的分离、增殖 

噬菌体JS01是从食品加工厂的污水中分离到的。其分离、增殖过程如下：

（1）首先配制所需培养基：LB液体培养基：1L水中加入10g蛋白胨、5g酵母粉、10g NaCl；2×LB液体培养基：1L水中加入20g蛋白胨、10g酵母粉、20g NaCl；底层培养基：LB液体培养基中加入1.5%琼脂粉；上层培养基：LB液体培养基中加入0.7%琼脂粉；