[发明专利]一种同时检测水中多种微囊藻毒素的方法

说明书

技术领域

本发明属于水环境污染物的检测技术领域。特别涉及一种水体中多种痕量微囊藻毒素的检测方法，具体地说是针对地表水中多种痕量微囊藻毒素的检测方法。

背景技术

微囊藻毒素(microcystin，MC)是水体富营养化发生后，蓝藻凋亡所产生的毒素，通过食物链危害人体健康，造成肝损伤。研究结果表明，富营养化水体中MCs的含量甚微，仅为ng/L或μg/L级，因此，检测痕量MCs要求分析方法具有较高的灵敏度、准确性和重复性。20世纪80～90年代，我国主要使用酶联免疫吸附(ELISA)法检测富营养化水体中的MCs，ELISA方法具有高效、快速、灵敏度高等特点，但是其抗体通常只是针对某一种MC建立起来的，对其他类型MCs的交叉反应性不高，不能检测MCs的一些异构体。随着色谱技术的发展，可以对不同异构体的MCs进行定量检测，

目前通常采用高效液相色谱(HPLC)法检测富营养化水体中痕量MCs。HPLC具有准确、灵敏、重现性好等特点，是WHO、英美等发达国家和我国权威机构推荐的MCs检测方法。以往的研究，利用HPLC主要分析MC-LR，分析时间一般大于10min。然而根据甲基化、羟基化、异构化程度以及可变氨基酸的不同，已经发现了80种微囊藻毒素的亚型，因此，仅仅检测MC-LR已远远不能满足人们对饮用水安全的要求。鉴于此，需建立一种经济、快速、灵敏、准确的且能同时分析多种MCs(MC-RR、YR、LR、LA和LY)的分析方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时检测水中多种微囊藻毒素的方法，以经济、快速、灵敏、准确的同时分析多种微囊藻毒素。

为实现上述目的，本发明提供的同时检测水样中多种微囊藻毒素的方法，是采用固相萃取-液相色谱对水中多种微囊藻毒素(MC-RR、MC-YR、MC-LR、MC-LA和MC-LY)进行测定，其主要步骤包括：

1)配制多种微囊藻毒素的标准溶液，采用液相色谱反相萃取柱制备标准曲线；

2)将预处理的待测水样采用HLB固相萃取柱进行固相萃取富集，用含有体积浓度0.1-0.15％三氟乙酸的甲醇洗脱，洗脱液在氮气流下吹干，加入甲醇溶解制成待测溶液；

3)将步骤2的待测溶液采用液相色谱反相萃取柱进行测定，测定结果与标准曲线比较，得到待测水中各种微囊藻毒素的含量。

所述的方法，其中，反相萃取柱为C18柱、C8柱或C2柱。

所述的方法，其中，待测水样的预处理是经0.45μm的亲水性尼龙微孔滤膜负压抽滤。

所述的方法，其中，HLB固相萃取柱预先进行活化，活化的顺序为：10mL色谱纯甲醇、15-20mL超纯水，流速为＜1mL/min。

所述的方法，其中，固相萃取富集的条件为：流速2-5mL/min，富集结束后真空抽干1min，洗脱液流速小于1mL/min。

所述的方法，其中，液相色谱测定条件为：采用甲醇和体积比0.01-0.03％三氟乙酸超纯水为流动相，流速1mL/min，柱温箱30℃；甲醇的体积比：0-5min为55％，6-10min为65％，10.0min为55％并维持至12min。

本发明采用固相萃取-高效液相色谱法实现对水环境样品中痕量微囊藻毒素的富集和定量测定，操作简单易行，分析快速准确。目前，尚未见有与本发明的检测方法及其效果类似的相关报道。

附图说明

图1为1μg/mL的5种MCs混合标准品溶液的色谱图，出峰顺序为MC-RR：3.916min；MC-YR：5.344min；MC-LR：6.917min；MC-LA：9.733min；MC-LY：10.316min。

具体实施方式

本发明提供的水体中5种痕量微囊藻毒素(MC-RR、MC-YR、MC-LR、MC-LA和MC-LY)的检测方法如下：

1)水样预处理

依次利用10mL色谱纯甲醇、15-20mL超纯水活化Waters公司的HLB(500mg，6cc)固相萃取柱，控制流速小于1mL/min；

2)浓缩富集

利用10mL含0.1％三氟乙酸(体积分数)的纯甲醇洗脱HLB柱，控制流速小于1mL/min，洗脱液收集于10mL尖底玻璃离心管中，洗脱液在氮气流下缓慢吹直至近干，加入1mL甲醇溶解残留物，漩涡混合，待测；

3)利用高效液相色谱(HPLC)定量检测5种MCs

色谱柱：ZORBAX 300SB C18，4.6mm×150mm×5μm；