[发明专利]运用交叉引物核酸恒温扩增技术检测沙门菌的试剂及其扩增方法和检测方法

权利要求书

1.一种运用交叉引物核酸恒温扩增技术检测沙门菌的试剂，其特征在于，包括以下五个引物 ：

SEQ ID NO.1：5’ GCGGAAGTCGCGGCCCG

SEQ ID NO.2：5’ TCGCACCGTCAAAGGAACC

SEQ ID NO.3：5’ AGGCCGGTATTATTGATGC

SEQ ID NO.4：5' TTTCTCTGGATGGTATGC

SEQ ID NO.5：5' AGATGAGTATTGATGCCGATTTGTCAGTACGCTTCGCCGTTCGC

其中引物序列3的5’端有异硫氰酸荧光素基团标记，引物序列4的5’端有生物素荧光基团标记。

2.根据权利要求1所述的运用交叉引物核酸恒温扩增技术检测沙门菌的试剂，其特征在于，核酸扩增反应体系中各组分构成比例如下：            

成分                            浓度            加样量              

Bst酶                          5U/μL           1μL

Bst酶缓冲液                       -             5μL

SEQ ID NO.1：                  10μmol/L        1μL

SEQ ID NO.2：                  10μmol/L        1μL

SEQ ID NO.3：                  10μmol/L        0.5μL

SEQ ID NO.4：                  10μmol/L        0.5μL

SEQ ID NO.5：                  10μmol/L        0.2μL

DNA样品                                         2μL

双蒸水                                           13.8μL

总体积                                           25 μL 

其中Bst酶缓冲液的成分为20 mM Tris-HCl 、10 mM (NH₄)₂SO₄、10 mM KCl、2 mM MgSO₄、质量百分比0.1 % Triton X-100，且pH 为8.8 。

3.一种权利要求1所述的运用交叉引物核酸恒温扩增技术检测沙门菌的试剂的扩增方法，其特征在于，核酸扩增程序为：

（1）63℃   90分钟； 

（2）80℃   2分钟。

4.一种权利要求1所述的运用交叉引物核酸恒温扩增技术检测沙门菌的试剂的检测方法，其特征在于，将反应液滴至能够检测异硫氰酸荧光素基团和生物素荧光基团同时标记的核酸样品的胶体金检测试纸上，在15-30分钟内读取结果，如果仅在质控区C出现一条红线，表示样品中无沙门氏菌；如果出现两条红线，一条检测线，一条质控线，表示样品中存在沙门氏菌；如果无红线出现，表明检测失败，样品需要重新检测。