[发明专利]具有高骨转移潜能的人大细胞肺癌细胞株

说明书

技术领域

本发明属生物技术、微生物动物细胞系领域，具体涉及一种具有高骨转移潜能的人大细胞肺癌细胞株及其用途。 

背景技术

肺癌是严重威胁人类生存和发展的恶性疾病之一，已成为肿瘤疾病中的头号杀手。虽然目前临床对肺癌的治疗已经取得长足的进展，但统计显示，肺癌死亡率仍长期居高不下；研究分析其主要原因在于该疾患难以早期诊断以及它的高转移性。临床实践表明，许多患者首诊时即发现有多器官转移，因此，肿瘤转移和复发仍旧是肺癌治疗的难题；然而，目前，肺癌转移尤其是靶向转移(肿瘤细胞向特定器官进行转移)的分子机理还不清楚。有统计显示，肺癌的发病率呈逐年上升趋势，且非常容易发生骨、脑、肝脏的转移，病人的预后很差。当前，有肿瘤转移相关分子的研究发现了各种各样的分子，如降解细胞基质的分子、细胞黏附分子、转移相关糖蛋白等，但上述研究都没有对肿瘤向特定器官进行转移的机制进行说明。 

发明内容

本发明的目的是提供一种具有高骨转移潜能的人大细胞肺癌细胞株。本发明的进一步目的是提供上述肺癌细胞株的医用用途。 

本发明采用人大细胞肺癌亲代细胞作为建系的源细胞，通过细胞常规培养的方法，种植在实验裸鼠左心室，在裸鼠体内外反复筛选6个cycles，建立了具有高骨转移潜能的人大细胞肺癌细胞系，该细胞系可作为一个理想的人肺癌的定向骨转移研究的细胞模型，用于人肺癌的转移机制研究和抗转移药物筛选。 

具体而言，本发明采用人大细胞肺癌细胞株(NCI-H460，购于上海中科院细胞所)细胞作为源细胞，经免疫缺陷小鼠(BALB/c-nu-nu)体内外筛选六次，筛选培养成功定向骨转移人大细胞肺癌细胞，该人大细胞肺癌骨转移细胞命名为H460BM(The Human Large-cell Lung Carcinoma with Highly Bone Metastases，H460BM)。已于2011年10月28日保藏， 保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCC No.5406，分类命名：人大细胞肺癌细胞骨转移细胞株NCI-H460BM。 

本发明中，所述的具有定向骨转移潜能的人大细胞肺癌细胞株，致瘤率稳定维持在100％；体外培养细胞在显微镜下显示为贴壁生长，且细胞面积比SPC-A-1略小；经裸鼠左心室种植(75-80万细胞/只)三周后陆续出现小鼠下肢不便，经放射性核素micro pinhole骨显像检测和病理确定为骨转移100％；同时仅有10％颌下腺转移。 

本发明的具有定向骨转移潜能的人大细胞肺癌细胞株具有如下生物学特征： 

1、贴壁生长； 

2、其染色体分析为亚三倍体(如图3所示)； 

3、定向骨转移、快速生长和代谢旺盛； 

4、荧光定量PCR验证cDNA芯片结果，TMEM100跨膜蛋白高表达(如图5所示)。 

本发明中，采用获得的人大细胞肺癌骨转移细胞H460BM进行系统地cDNA基因组芯片和分析，将基因的表达变化与基因组的扩增或缺失相联系，并结合microRNA的靶标数据库(miRBase)，筛选那些有位于基因组上缺失或扩增区域的同时有表达变化的microRNA，将上述microRNA的调控靶标(即受上述microRNA调控的基因)与在各转移细胞中表达发生变化的且位于基因组缺失或扩增区域的基因进行比较，挑选重叠的基因进行研究，明确分子靶标功能，结果显示，cDNA基因组芯片和分析有利于发现关键的或起决定作用的与靶向转移相关的基因或microRNA，可深入揭示肺癌靶向转移的分子机理，为阻断转移提供候选的分子靶标；可进一步用于肺癌病人的检测，评估其发生转移以及转移部位的风险，从而为有针对性地治疗提供依据，以及为分子靶向治疗奠定基础。 

本发明中，通过亲代细胞和骨转移细胞杂交，cDNA芯片筛选出高表达Biomarker，经实时荧光定量PCR验证，结果表明，TMEM100是肺癌骨转移检出的候选基因，该分子靶标能对人肺癌转移早期诊断提供参考数据，还可进一步用于评估包括化学、生物、免疫、中医药、放射性等药物的治疗疗效；此外，还为肺癌骨转移的早期诊断、评估疗效提供一种有 效的分子检测方法。 

附图说明

图1显示了人大细胞肺癌H460细胞。 

图2显示了骨转移细胞H460BM。 

图3为染色体分析图。 

图4显示了cDNA芯片。 

图5显示了实时荧光定量PCR验证情况。