[发明专利]一种适合白腐真菌生长及产漆酶的液体培养基及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及真菌培养技术领域，具体涉及一种适合白腐真菌生长及产漆酶的液体培养基及其应用。

背景技术

漆酶是一种含铜的多酚氧化酶，其作用底物广泛，能够有效降解木质素及催化氧化多种酚和芳胺类化合物，在生物能源、环境保护、造纸工业、食品工业、生物检测等领域均具有广阔的应用前景和潜在应用价值。大部分能够引起木本或草本植物腐化的真菌均能产生漆酶。其中，白腐真菌是一类能够引起木质白色腐烂的丝状真菌的统称，具有突出的木质素降解能力，主要为担子菌，少部分为子囊菌，包括革盖菌属（Coriolus）、卧孔菌属（Poria）、多孔菌属（Polyporus）、原毛平革菌属（Phanerochaete）、侧耳属（Pleurotus）、烟管菌属（Bjerkandera）和栓菌属（Trametes）等。

白腐真菌多为好氧微生物，培养温度一般在28~30℃左右，在pH3.0～8.0的范围均能稳定产酶。白腐真菌的产酶能力与其培养条件密切相关。碳源、氮源、无机盐及各类诱导物是提高漆酶产量的关键因素。

碳源和氮源对于微生物的生长和代谢是必不可少的。然而，来源不同的微生物对培养基成分的要求有很大差异。对于白腐真菌，常见的碳源有葡萄糖、蔗糖、甘油、玉米粉、麦草粉、麸皮等；常用的氮源为(NH₄)₂SO₄ 、NH₄Cl等无机氮源，酵母提取物、蛋白胨等有机氮源以及玉米粉、马铃薯、麦麸等天然含氮物质。

此外，许多金属离子和化合物以不同的方式添加到培养基中，以诱导漆酶基因表达，提高漆酶产量。常见的金属离子诱导物有Cu²⁺、Mn²⁺等，常见的诱导剂有香兰素、愈创木酚和丹宁酸等。一些天然的含木质素的物质，如麸皮、麦草粉、木屑木汁、蔗渣等，不仅为培养基提供碳氮源，同时也可用于诱导漆酶的产生。

目前，最常见的用于培养白腐真菌的培养基是新鲜土豆所制成的PDA液体培养，通常于培养基中添加适量的麦麸诱导漆酶产生。然而，于PDA液体培养基中培养白腐真菌，虽然菌体生长快速，但是漆酶产量却十分低下，不足以用于纯化利用。本发明涉及的适合白腐真菌生长和高产漆酶的液体培养基，不仅为菌体生长提供充足的营养成分，还能促进菌体分泌漆酶。与一般的PDA液体培养基相比，同种真菌的漆酶产量可提高5至50倍，足以分离纯化并加以利用。

发明内容

本发明的目的在于根据现有技术中存在的上述不足，提供一种不仅适合白腐真菌的生长，还能够促进白腐真菌分泌漆酶的液体培养基。

本发明另一目的在于提供上述液体培养基的制备方法。

本发明还有一个目的在于提供上述液体培养基的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案予以实现：

一种适合白腐真菌生长的液体培养基，由碳源、氮源、大量元素、微量元素和水组成；其中，所述碳源为甘油，所述氮源为酸水解干酪素与麦麸或麦麸水解物的混合；所述大量元素为磷酸氢二铵、磷酸二氢钾、七水硫酸镁、琥珀酸钠、五水硫酸铜、维生素B1和吐温-80；所述微量元素为氯化钠、一水硫酸锰、氯化钙、七水硫酸亚铁、硫酸锌、氯化钴、十二水硫酸铝钾、钼酸钠和硼酸。

作为一种优选方案，上述液体培养基由如下组分组成：0.001~10%（v/v）甘油，0.001~10%（w/v）酸水解干酵素，0.001~10%麦麸或麦麸水解物，0.01~10g/L磷酸氢二铵，0.01~10g/L磷酸二氢钾，0.01~10g/L七水硫酸镁，0.01~10g/L琥珀酸钠，0.01~10g/L五水硫酸铜，0.001~10g/L维生素B1，0.001~10% (v/v)吐温-80，0.0001~0.1g/L氯化钠，0.0001~0.1g/L一水硫酸锰，0.0001~0.1g/L氯化钙，0.0001~0.1g/L七水硫酸亚铁，0.0001~0.1g/L硫酸锌，0.00001~0.01g/L氯化钴，0.00001~0.01g/L十二水硫酸铝钾，0.00001~0.01g/L钼酸钠， 0.00001~0.01g/L硼酸。

本发明上述液体培养基的制备方法是将各组分混合，搅拌均匀，调节pH至2.0~8.0后，分装灭菌而得。

本发明上述液体培养基可以用于培养白腐真菌，还可以促进白腐真菌分泌漆酶。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：