[发明专利]待测物的电化学检测方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种待测物的电化学检测方法。更详细地说，本发明涉及一种待测物的电化学检测方法，该方法用于核酸、蛋白质等待测物的检测和定量等，还用于用上述物质进行疾病的临床检查和诊断等。

背景技术：

在疾病的临床检查和诊断中，一般是用基因检测法和免疫学检测法等检测方法检测生物试样中所含的上述疾病的相关基因和蛋白质等。在这种临床检查和诊断的方法中，已知有待测物的电化学检测方法。具体而言，人们提出的方法中，将下述物用于检测基因和蛋白质等待测物：用光激励具有光化学活性的标记物所产生的电流、对具有电化学活性的标记物施加电压所产生的光或光激励所产生的电流。

在此，当检测样本中的待测物并进行临床检查和诊断时，往往要求高灵敏度地检测出样本中所含微量待测物。因此，比如美国专利公报(U.S.Patent Publication)第2006/078912号中提出了用载体粒子检测待测物的方法，其中该载体粒子具有有电化学活性的众多ECL和与待测物结合的探针。在此，当进行ECL电化学发光检测时，溶解上述载体，释放ECL，使之分散。以此提高ECL与电解质的接触效率，提高检测灵敏度。如此，人们期望开发出一种能用电化学检测方法更灵敏地检测待测物的电化学检测方法。

发明内容：

本发明的范围只由后附权利要求书所规定，在任何程度上都不受这一节发明内容的陈述所限。

本发明的目的在于提供一种能比以往方法更灵敏地检测出待测物的电化学检测方法。

本发明人经过锐意钻研，发现通过以下三点可以解决上述课题：

(1)在工作电极上形成含有标记结合物和待测物的复合物，其中，该标记结合物具有与待测物结合的结合物和含标记物的修饰标记物相结合的溶解性载体，

(2)溶解此复合物中的标记结合物中所含溶解性载体，以及

(3)将修饰标记物诱导至工作电极上。

即，本发明人发现，当对待测物进行电化学检测时，通过上述(1)～(3)的操作，无论待测物的大小等，可以高效获取基于与待测物的量相应的标记物的信号，从而得以高灵敏度地对待测物进行电化学检测。

本发明正是基于本发明人的这种发现。

因此，本发明提供：

(1)一种用电化学方式检测待测物的方法，包括：让含有待测物的试样接触工作电极，并将其捕捉在工作电极上；让标记结合物接触捕捉有所述待测物的工作电极，在所述工作电极上形成含有所述待测物与所述标记结合物的复合物，其中，所述标记结合物有与待测物结合的结合物和含标记物的修饰标记物相结合的溶解性载体；通过溶解所述工作电极上形成的复合物中所含所述溶解性载体，使所述修饰标记物游离；将所述修饰标记物诱导到工作电极上；对所述修饰标记物中的标记物进行电化学检测。

(2)根据(1)所述的方法，其中：修饰标记物还含有诱导用修饰物。

(3)根据(2)所述的方法，其中：诱导用修饰物为核酸。

(4)根据(3)所述的方法，其中：核酸是DNA或RNA。

(5)根据(1)～(4)其中任意一项所述的方法，其特征在于：在诱导步骤中，靠极性的不同将所述修饰标记物诱导到工作电极上。

(6)根据(5)所述的方法，其中：用含有离液序列高的离子(Chaotropic ion)的液体产生所述不同极性。

(7)根据(6)所述方法，其中：离液序列高的离子为以下物质构成的群中的至少一种：碘化物离子、溴化物离子、胍离子、硫氰酸离子、三溴乙酸离子、三氯乙酸离子、高氯酸离子、二氯乙酸离子、硝酸离子、氯化物离子、乙酸离子、钡离子、钙离子、锂离子、铯离子、钾离子、镁离子。

(8)根据(1)～(4)其中任意一项所述的方法，其中：在游离步骤中，用溶解溶解性载体的溶剂使所述溶解性载体溶解。

(9)根据(8)所述方法，其中：溶解性载体由溶解于溶剂的金属或其合金构成。

(10)根据(9)所述的方法，其中：溶解性载体为金纳米粒子。

(11)根据(8)所述的方法，其中：溶剂含有碘或碘化物。

(12)根据(1)～(4)其中任意一项所述的方法，其中：溶解性载体是因热而熔解的载体；在游离步骤中，通过加热该溶解性载体使所述溶解性载体溶解。

(13)根据(1)～(4)其中任意一项所述的方法，其中：在检测步骤中，在有电解液存在的情况下对修饰标记物中的标记物进行电化学检测。