[发明专利]一种生产WF16616的发酵培养基及使用方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种生产WF16616的发酵培养基及其使用方法和用途。

背景技术

WF16616(FR190293)是1998年从真菌Tolypocladium parasiticum No.16616的发酵培养液中分离得到的一种脂肽类物质，其分子式为C₅₁H₈₂N₈O₂₁S，经过结构修饰改造可以得到一种新型棘白菌素类抗真菌药物米卡芬净(Micafungin，MFG，FK-463)。WF16616(FR190293)及FK463结构式如下：

WF16616(FR190293)结构式

FK-463结构式

米卡芬净对念珠菌属、曲菌属具有广泛抗真菌作用，对耐氟康唑与依曲康唑的念珠菌亦有作用；能够非竞争性抑制1，3-β-D葡聚糖合成酶的活性，从而抑制真菌细胞壁合成，故该化合物对真菌细胞具有较高的特异性，对人体副作用较小。

米卡芬净由日本藤泽公司开发，于2002年12月在日本上市，商品名为Fungard，2005年3月通过美国FDA认证。目前本品主要获准用于治疗以目前的治疗手段难以治愈的真菌感染以及预防造血干细胞移植患者的真菌感染。

专利US005854276A公布了利用真菌Tolypocladium parasiticum No.16616发酵生产WF16616的过程：从斜面培养基上取一环生长时间为两周的WF16616产生菌，接种于含种子培养基(蔗糖2％，棉子粉2％，干酵母1％，聚蛋白胨1％，甘油2％，KH₂PO₄ 0.1％，Tween-80 0.1％，121℃灭菌30min，上述百分比均为重量百分比)的500ml摇瓶中，装量160ml，25℃振荡培养一周后，接种于含20L发酵培养基(葡萄糖1％，玉米淀粉2％，大豆粉0.5％，干酵母0.5％，棉子粉1％，KH₂PO₄ 0.1％，Tween-80 0.1％，121℃灭菌30min，上述百分比均为重量百分比)的30L发酵罐中，200rpm搅拌，通气量为20L/min，25℃培养6天后，所得15L发酵液经分离纯化后得到纯品46.6mg，约3.1mg/L，WF16616产量很低。

Ryuichi Kanasaki et al.J.Antibiot.59(3)：158-167，2006公布了利用真菌Tolypocladium parasiticum No.16616发酵生产WF16616的过程：从斜面培养基上取一环生长时间为两周的WF16616产生菌，接种于含种子培养基(蔗糖2％，Pharmamedia 2％，干酵母1％，聚蛋白胨1％，甘油2％，KH₂PO₄ 0.1％，Tween-80 0.1％，121℃灭菌30min，上述百分比均为重量百分比)的500ml摇瓶中，装量160ml，25℃振荡培养7天后，接种于含20L发酵培养基(葡萄糖1％，玉米淀粉2％，黄豆粉0.5％，干酵母0.5％，Pharmamedia 1％，Adekanol LG-1090.05％，Silicone KM-700.05％，121℃灭菌30min，上述百分比均为重量百分比)的30L发酵罐中，200rpm搅拌，通气量为20L/min，25℃培养6天后，所得15L发酵液经分离纯化后也只得到纯品47mg，约3.1mg/L，WF16616的产量同样很低。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服了现有的用于发酵WF16616的发酵培养基产量低的缺陷，提供了一种用于培养Tolypocladium parasiticum No.16616以生产WF16616的发酵培养基及其用途，以及一种发酵生产WF16616的方法。本发明的发酵培养基能够使得WF16616的菌丝量由8％升至30％以上，发酵产物的产率高，效价达到300-420mg/L。

本发明提供了一种生产WF16616的发酵培养基，其原料包括1-10％的碳源、1-6％的有机氮源和0.1-1％的无机磷酸盐，其中所述的碳源包括甘露醇和玉米淀粉；所述的氮源为棉籽粉、干酵母和聚蛋白胨，或者为黄豆饼粉、干酵母和聚蛋白胨；百分比为相对于所述发酵培养基的重量百分比。