[发明专利]抗人γδTCR单克隆抗体的重组单链抗体G5‑4ScFv及其编码基因与应用

权利要求书

1.一种抗人γδTCR单克隆抗体的重组单链抗体，其重链可变区具有序列表中的SEQ ID No：1的氨基酸残基序列，轻链可变区具有序列表中的SEQ ID No：2的氨基酸残基序列。

2.根据权利要求1所述的抗人γδTCR单克隆抗体的重组单链抗体，其特征在于：所述重链可变区和轻链可变区通过柔性连接肽连接，所述柔性连接肽的氨基酸残基序列的通式为(Gly₄Ser)n，n为1-5的整数，优选为3，其中n为3时的重组单链抗体的氨基酸残基序列如序列表中序列5所示。

3.编码权利要求1或2所述重组单链抗体的基因。

4.根据权利要求3所述的基因，其特征在于：所述重链可变区编码基因具有序列表中SEQ ID No：3的DNA序列或编码序列表中SEQ ID No：1的DNA序列或在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID No：3限定的DNA序列杂交的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID No：3限定的DNA序列杂交的核苷酸序列，其轻链可变区编码基因具有序列表中SEQ ID No：4的DNA序列或编码序列表中SEQ ID No：2的DNA序列或在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID No：4限定的DNA序列杂交的核苷酸序列或在高严谨条件下可与序列表中SEQ ID No：4限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。

5.根据权利要求3所述的基因，其特征在于：编码所述具有(Gly₄Ser)₃柔性连接肽的重组单链抗体的基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No：6所示。

6.含有权利要求3或4或5所述基因的表达载体、转基因细胞系和宿主菌；具体包括保藏号CGMCC No.4983的重组单链抗体G5-4ScFv的表达工程菌G5-4SCFV-PET22b(+)-sp-transB和保藏号CGMCC No.4984的重组G5-4ScFv蛋白的表达工程菌G5-4SCFV-PET22b(+)-transB。

7.一种表达权利要求1所述抗人γδTCR单克隆抗体重组单链抗体的方法，是将权利要求3所述基因插入表达载体中，再将构建的重组表达载体导入宿主细胞，经表达、纯化得到高活性的抗人γδTCR单克隆抗体重组单链抗体。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述重组表达载体具体为将所述重组单链抗体G5-4ScFv基因插入pET-22b(+)的多克隆位点得到的重组表达载体G5-4ScFv-PET22b(+)-sp和G5-4ScFv-PET22b(+)；转化有G5-4ScFv-PET22b(+)-sp或G5-4ScFv-PET22b(+)的重组大肠杆菌分别为G5-4SCFV-PET22b(+)-sp-transB或G5-4SCFV-PET22b(+)-transB；在大肠杆菌宿主细胞进行表达时需加入IPTG诱导剂，所加入IPTG的浓度为200μmol/L，诱导温度为16-37℃，优选为20℃。

9.权利要求1或2所述的抗人γδTCR单克隆抗体的重组单链抗体在制备扩增γδT细胞制剂中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：具体方法为：用5μg/mL的重组单链抗体G5-4ScFv包被培养板，加入2×10⁶个新鲜分离的人PBMC，用含IL-2(200U/mL)的RP1640完全培养基培养2周，得到纯度较高的γδT细胞。