[发明专利]重组鸡马立克氏病病毒SC9-1株和SC9-2株的构建和应用

权利要求书

1.一种重组鸡马立克氏病病毒的基因组构建物，其特征在于所述基因组构建物上带有三个位于特定位点的特定序列，此特定序列还可作为本病毒的鉴别性标志：

(1)在原有的二个Meq基因位点，在敲除Meq基因后，各留下一个34bp的序列5：FRT：5′-GAAGTTCCTA TACTTTCTAG AGAATAGGAA CTTC-3′；敲除二个Meq基因后，MDVSC9-1株和MDV SC9-2株完全没有致病性；(2)在病毒基因组的US/TRS片段连接点的上游约370bp处插入了一段约539bp的REV-LTR片段序列6：

5′-CATTGTGGGAGGGAGCTCCGGGGGAATGTGGGAGGGAGCTCCGGGGGGAATAGCGCTGGCTCGCTAACTGCCATATTAGCTTCTGTAGTCATGCTTGCTTGCCTTAGCCGCCATTGTACTTGATATATTTCGCTGATATCATTTCTCGGAATCGGCATCAAGAGCAGGCTCATAAACCCATAAAAGGAAATGTTTGTTGAAGGCAAGCATCAGACCACTTGCACCATCCAATCACGAACAAACACGAGATCGAACCATCATACTGAGCCAATGGTTGTAAAGGGCAGATGCTATCCTCCAATGAGGGAAAATGTCATGCAACATCCTGTAAGCGGCTATATAAGCCAGGTGCATCTCTTGCTCGGGGTCGCCGTCCTACACATTGTTGTGACGTGCGGCCCAGATTCGAATCTGTAATAAAAGCTTTTTCTTCTATATCCTCAGATTGGCAGTGAGAGGAGATTTTGTTCGTGGTGTTGGCTGGCCTACTGGGTGGGGTAGGGATCCGGACTGAATACCGTAGTATTTCGGTACAACAA-3′。

2.一种含有权利要求1所述基因组构建物的重组的鸡马立克氏病疫苗病毒MDV SC9-1株/或MDV SC9-2株，其特征在于其基因组利用flp-kan+重组方法敲除了2个meq基因且不含卡那霉素抗性基因，第一个卡那霉素抗性基因是用常规的flp酶法去除，第二个卡那霉素抗性基因则是用不完全flp酶消化加卡那霉素抗性负筛选法去除的，由此得到能用于转染细胞产生SC9-1病毒的重组BAC质粒pSC9-BAC；然后再进一步去除最初构建BAC克隆过程中插入的BAC载体的相关基因，如氯霉素抗性基因、mini-F因子由此得到能用于转染细胞产生SC9-2病毒的重组BAC质粒pSC9-BAC-Kana-Sv-Cre-US2；

MDV SC9-1株已于2010年8月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.4399；

MDV SC9-2株已于2011年11月24日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.5502。

3.一种包含如权利要求2所述的重组鸡马立克氏病病毒MDV SC9-1株或SC9-2株感染的鸡胚成纤维细胞。

4.一种鸡马立克氏病病毒疫苗，其特征在于包含权利要求1所述的重组鸡马立克氏病病毒的基因组构建物。

5.一种鸡马立克氏病病毒疫苗，其特征在于包含权利要求2所述的重组的鸡马立克氏病疫苗病毒MDV SC9-1株或MDV SC9-2株。

6.一种鸡马立克氏病病毒疫苗，其特征在于包含权利要求3所述的鸡胚成纤维细胞。

7.一种根据权利要求1所述的重组鸡马立克氏病病毒的基因组构建物、权利要求2所述的重组的鸡马立克氏病疫苗病毒MDV SC9-1株或MDV SC9-2株和权利要求3所述的鸡胚成纤维细胞在制备鸡马立克氏病病毒疫苗中的用途。

8.预防鸡马立克氏病的方法，其中向鸡给予预防有效剂量的鸡马立克氏病病毒疫苗，所述的疫苗包含选自权利要求1所述的重组鸡马立克氏病病毒的基因组构建物，包含权利要求2所述的重组的鸡马立克氏病疫苗病毒MDV SC9-1株或SC9-2株，或者包含权利要求3所述的鸡胚成纤维细胞。