[发明专利]一种快速提取禽类血液基因组DNA的方法无效
| 申请号： | 201110394603.0 | 申请日： | 2011-12-01 |
| 公开（公告）号： | CN102690805A | 公开（公告）日： | 2012-09-26 |
| 发明（设计）人： | 张小辉;祁艳霞;王锐;赵淑娟;庞有志 | 申请（专利权）人： | 河南科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 郑州睿信知识产权代理有限公司 41119 | 代理人： | 牛爱周 |
| 地址： | 471003 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 提取 禽类 血液 基因组 dna 方法 | ||
1.一种快速提取禽类血液基因组DNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)取抗凝血，将其与细胞裂解液混合形成混合液，向混合液中加入蛋白酶K；
(2)在55-65℃的温度下，水浴消化3-5小时；
(3)加预冷的乙醇，充分混匀，乙醇使溶液中的DNA和部分蛋白一起沉淀；10000rpm离心5min，弃上清液；
(4)加双蒸水ddH2O溶解沉淀；10000rpm离心5min，吸上清液到干净的离心管中；
(5)加入4mol/L的NaAc和预冷的乙醇，充分混匀；10000rpm离心5min，弃上清液，加75％的预冷乙醇，出现白色絮状沉淀，即基因组DNA。
2.根据权利要求1所述的快速提取禽类血液基因组DNA的方法，其特征在于：所述的细胞裂解液的组成是：0.5M EDTA 35-45ml，1M Tris·HCl 6-12ml，5M NaCl 2-6ml，10％SDS 8-12ml。
3.根据权利要求1所述的快速提取禽类血液基因组DNA的方法，其特征在于：步骤(1)中抗凝血与细胞裂解液的体积比为1∶50。
4.根据权利要求1所述的快速提取禽类血液基因组DNA的方法，其特征在于：步骤(1)中蛋白酶K的加入量与抗凝血与细胞裂解液所形成混合液的比值为1∶125。
5.根据权利要求1所述的快速提取禽类血液基因组DNA的方法，其特征在于：步骤(3)中乙醇的加入量占总体积的70％-90％。
6.根据权利要求1所述的快速提取禽类血液基因组DNA的方法，其特征在于：步骤(5)中使NaAc的含量为0.1-0.2mol/L，预冷的乙醇的浓度达到70％以上。
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