[发明专利]用于siRNA传递的纳米泡载体

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及用于siRNA传递的纳米泡载体。

背景技术

siRNA中文名称是小干扰脱氧核糖核酸，是基于基因沉默(RNAi)技术而设计的一种核酸活性成分。siRNA是人工合成的双链RNA，是一种小RNA分子(21-25核苷酸)，由Dicer(RNAaseIII家族中对双链RNA具有特异性的酶)加工而成。siRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。siRNA无论得到的方法如何，如化学合成、体外转录、用RNAaseIII消化长片断双链RNA制备siRNA、siRNA表达载体、病毒载体、siRNA表达框架，因为它们的分子结构相同，理化性质也一样，只是产品形式可能有所不同，即保存在什么溶液中。

siRNA自发现以来已获得大量关注，但一直没有作为新药上市，最重要的问题是siRNA作为核酸分子，很容易被体内核酸酶降解，并且siRNA从注射部位到达作用部位要经历很多过程途径，进入细胞后，还有从内涵体或溶酶体中逃逸，进入胞浆，才能发挥作用。siRNA的特殊性使其制剂研究非常困难。

发明内容

本发明人出乎意料地发现我们设计的一种纳米泡载体，可以在体外和体内传递siRNA，并且在携带siRNA的纳米泡经过部位或作用部位施加超声手段，可以促进siRNA的释放，并起到相应的药理作用。

本发明公开的用于siRNA传递的纳米泡载体，其特征是纳米泡由聚酯-聚乙二醇嵌段共聚物和阳离子脂质构成外壳，内部充填气体或在正常体温下转化为气体的液体。

本发明中的siRNA根据所表达的功能特点而设计核苷酸序列，并通过生物技术公司合成得到。siRNA的功能包括各种疾病的治疗用途，例如各种病毒性肝炎、肿瘤、心血管疾病、免疫性疾病。

本发明中的聚酯-聚乙二醇嵌段共聚物选自聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物、聚乳酸羟基乙酸-聚乙二醇嵌段共聚物，优选的是聚乳酸羟基乙酸-聚乙二醇嵌段共聚物。聚乳酸羟基乙酸-聚乙二醇嵌段共聚物中聚乳酸羟基乙酸嵌段的分子量范围是1000～20000，优选的是2000～10000，更优选的是3000～10000；聚乙二醇嵌段的分子量范围是500～10000，优选的是1000～5000，更优选的是1500～3000。聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物和聚乳酸羟基乙酸-聚乙二醇嵌段共聚物可以从市场上购买得到；或根据文献合成方法，也可以自行合成得到。

本发明中的阳离子脂质选自1，2-二油酰-3-三甲基胺基丙烷、双十八烷基二甲基溴化铵、双十烷基二甲基溴化铵、双十二烷基二甲基溴化铵、尿嘧啶脂质衍生物、1，4-二氢吡啶脂质衍生物、二甲基羟乙基胺丙胺碳酰胆固醇酯、3β-(N-(N’，N’-二甲基氨基乙烷)碳酰)胆固醇、O，O’-双十四酰-N-三甲基氨基乙酰二乙醇胺盐酸盐、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、苯扎氯胺、鱼精蛋白、硬脂胺、二油酰磷脂酰乙醇胺。这些阳离子脂质都可以从市场上得到。

本发明中的气体选自空气、、氮气、氧气、二氧化碳、全氟丙烷、全氟丁烷、六氟化硫。

本发明中的在正常体温下转化为气体的液体是全氟戊烷。全氟戊烷的沸点是29.5℃。

本发明公开的用于siRNA传递的纳米泡载体，其特征是纳米泡粒径范围是20～700纳米，优选的是50～500纳米，更优选的是50～300纳米，进一步优选的是50～200纳米。

由于siRNA的水溶性，siRNA无法包裹在纳米泡内部，而只能通过静电作用，与纳米泡外壳中的阳离子脂质发生相互作用而进行包裹。本发明基于siRNA和纳米泡的特点还专门设计了用于siRNA传递的纳米泡载体的制备方法如下：

(1)将聚酯-聚乙二醇嵌段共聚物和阳离子脂质溶解在有机溶剂中；

(2)将含siRNA的水溶液在搅拌下加入上述溶液中；

(3)挥发或透析除去有机溶剂得到含siRNA的胶束溶液；

(4)在胶束溶液中加入气体或在正常体温下转化为气体的液体，并持续超声，形成纳米泡。

上述制备方法中，有机溶剂优选的是和水互溶的有机溶剂，选自乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇、二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二氧六环、二甲基亚砜。加入的siRNA水溶液占分散介质的有机溶液体积的5～80％，优选的是10～50％。

附图说明

图1.ELISA检测HBsAg OD值

具体实施方式

实施例1.载siRNA的纳米泡